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细胞技术

肝刺激因子对人肝癌细胞BEL-7402 p21ras表达的影响

2025-03-13 细胞技术 加入收藏
摘要:从雄性初断乳SD大鼠肝匀浆中提取肝刺激因子(HSS)并加以部分纯化, 观察其促人肝癌细胞增殖活性及对p21ras蛋白表达的影响。结果表明: (1) HSS

摘要:从雄性初断乳SD大鼠肝匀浆中提取肝刺激因子(HSS)并加以部分纯化, 观察其促人肝癌细胞增殖活性及对p21ras蛋白表达的影响。结果表明: (1) HSS具有明显的促人肝癌细胞增殖活性, 其分子量为14~20 kD; (2) HSS可提高p21ras蛋白表达, 具有时间-效应关系, 并与EGF呈协同作用; (3)HSS调节p21ras蛋白表达具有剂量-效应关系, 且呈现出饱和性。鉴于我们已报道HSS上调EGF受体蛋白和基因表达这一事实, 本实验结果进一步说明, HSS促人肝癌肝细胞增殖与其调节EGF受体介导的信号分子传导过程相关。

关键词:肝刺激因子;p21ras;肝脏再生

Abstract:The hepatic stimulator substance (HSS) was partially purified from schedule-lighted weanling rat livers. The effects of HSS on p21ras expression of human hepatic carcinoma cell BEL-7402 were examined. The results showed: (1) HSS was capable of promoting the proliferation of the cells, and its molecular weight was 14~20 kD; (2) the p21ras expression was increased under HSS effect time-dependently, and the effect of HSS appeared synergistic with EGF; (3) the p21ras expression induced by HSS manifested a dose-dependent manner, and the saturation effect of HSS occurred at the concentration of 100 μg/ml. Considering together with our previous report about HSS regulation on EGF receptor, these results strongly suggest that the proliferatory effect of HSS on hepatic carcinoma cells is presumedly related with EGF receptor-mediated signal transduction.

Key words:hepatic stimulator substance; p21ras; liver regeneration

肝脏具有强大的再生能力。肝再生是在多因素参与下精确有序的调节过程[1~3]。表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α(TGF-α)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素等均具有显著的促进肝细胞增殖的作用。然而, 这些生长因子不具有组织特异性, 因此仅从这些因子出发难以阐明肝再生调节的分子机制。

LaBrecque于1975年首先从初断乳大鼠肝中提取肝再生刺激因子(hepatic regenerative stimulatory substance, HRSS[4], 后称HSS), 继而研究了HSS的理化特征[5~8]。

HSS可刺激肝细胞DNA合成, 促进肝细胞由G1期进入S期[9]; 稳定细胞膜, 减轻CCl4和半乳糖胺对肝细胞的毒性作用[10,11]。体外研究证明, HSS确为人胎肝细胞基因表达产物[12]。尽管人们一直努力将HSS制成纯品[7, 13],但未见成功报道。鉴于HSS能增强EGF促肝细胞增殖活性, 近年来也有人将HSS称之为肝再生增强因子(augmentor of liver regeneration, ALR)[14]。HSS是否与已克隆出的ALR同为一体, 尚不能最终定论。

我们曾报道, HSS促肝细胞增殖活性与EGF受体表达相关[15,16]。为研究HSS对EGF受体介导下游信号传导的调节作用, 本实验观察了HSS对人肝癌细胞系BEL-7402 p21ras表达的影响, 以进一步探讨HSS作用的可能机制。

1.材料和方法

1.1 实验动物[17] 雄性初断乳SD大鼠(60~90 g), 节律光照饲养1周(7∶00~19∶00光照, 19∶00~次日7∶00避光), 自由饮食。

1.2 HSS的提取及部分纯化[18]将上述SD大鼠于第8日7∶00~9∶00之间断颈处死, 剖腹摘取肝脏, 制备HSS。将HSS浓缩(CT60, 丹麦Heto生产)至2 ml, 经Sephadex-G75(Superfine, 瑞典Pharmacia公司)层析, 流动相为DPBS(pH7.4), 洗脱速度为35 ml/h。以分光光度计(Lamda-Bio, 美国PE公司)测定流分体积的吸光值(OD280), 并以此为横坐标, OD280为纵坐标绘制蛋白的分离色谱图。


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