caspase-3的检测方法

问：

在本版里有看到过有关caspase-3的检测方法

（1）：免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达，用悬浮的细胞

（2）：western blot 理想结果：caspase-3有32ＫＤ的条带外，还出现了20ＫＤ和10ＫＤ大小的条带，表明caspase- 3被活花

（3）：RT-PCR检测mRNA的表达，用凝胶成像分析系统处理，可以半定量。

请问是否有更详细一些的实验步骤

还有这3种方法之间有没有什么优缺点，那种比较容易出结果。

答：

各种方法都有自己的优缺点，关键是根据实验目的选择适合的方法。

检测mRNA水平的表达，RT－PCR是广泛应用的比较好的方法；

检测蛋白水平的表达，可以选择免疫细胞化学，Westen－Blot等，前者可以在细胞内定位但定量效果不佳，后者操作比较复杂，如想在较高水平杂志发表论文最好选择此方法。检测Caspase－3活性还可以选用流式细胞仪来做，且可同时测定Caspase－8等的活性（多通路）。