酵母蛋白酶的问题
问:请问各位高手,我想让酵母蛋白酶A失活,决定采用PCR进行DNA序列的突变,此法行的通吗?可有前人研究过?答:国外有了"蛋白酶缺失"的用于
问:请问各位高手,我想让酵母蛋白酶A失活,决定采用PCR进行DNA序列的突变,此法行的通吗?可有前人研究过?
答:国外有了"蛋白酶缺失"的用于重组蛋白表达的菌株。国内也许也有,小龙对于上游不大懂,不知道自己构建蛋白酶缺失的酵母菌是否有技术上的难度。参见一篇综述《生命的化学》2003 年23 卷1 期CHEMISTRY OF L IFE 2003,23(1) 酵母表达系统及其应用研究。
假如只是为了降低重组蛋白表达时被水解的可能,在提取液中加入蛋白酶抑制剂如PMSF可以部分解决。