siRNA制备方法比较

比较项目

化学合成

体外转录

RNase III 降解 dsRNA

siRNA 表达载体

PCR 表达框

材料需求

21-mer RNA oligos( 一对 )

29-mer DNA oligos( 一对 )

转录模版 (200-1000bp ，两侧带 T7 启动子 )

55-60-mer DNA oligos( 一对 )

~50-mer DNA oligos( 一对 )

全部制备 / 合成时间所需时间

4 天 —2 周

24 小时 DNA oligo 合成时间

1 天 转录模版制备时间

5 天以上 DNA oligo 合成时间

~ 6 小时 DNA oligo 合成时间

个人所需操作时间

几乎不需要 *

中等

中等

多

中等

是否需要验证和寻找最有效 siRNA

需要

需要

不需要

需要

需要

能否标记 siRNA ( 例如用于荧光显微镜分析 siRNA 进入细胞过程或者在细胞中的定位）

能

能

能

不能

不能

转染的相对难易程度

好

好

好

差

差

可筛选性 ( 例如抗生素筛选 )

不可以

不可以

不可以

可以

不可以

能否用于长效抑制

不可以

不可以

不可以

可以（抗生素筛选）

不可以

能否大规模制备

可以

有限

有限

可以

有限