实验室常用溶液的配制标准程序

实验室常用溶液的配制标准程序

关键字： 溶液 配制 标准程序

1 、 目的

保证实验中用到的各种溶液符合实验要求。

2 、 该SOP变动程序

本文件的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报负责人决定。如通过则公布执行。

3 、 适用范围

XXXX研发部常用溶液：3M 醋酸钠、 2N NaOH 、 5M NaCL、 Solution Ⅰ 、 Solution Ⅱ Solution 、 Solution Ⅲ 、 LB培养基、 1M Tris-HCl 、 10 ×TE Buffer 、 10 × PBS Buffer 、 苯酚/ 氯仿/ 异戊醇 、 10%（W/V ）SDS 、 0.5M EDTA(pH 8.0) 、 50 ×TAEBUffer 、 20 ×SSC 、 封闭缓冲液（Wester杂交） 。

4 、 配制

4.1 、 用具

干燥洁净的200ml量桶一只，三角烧瓶两只，天平一架，250ml、1000ml广口瓶各一只。

4.2 、 配制步骤

4.2.1 、 配制NaAC溶液

⑴用天平称取40.8克分析纯的NaOAC固体，置于250ml三角烧瓶中。

⑵用100ml量桶准确取40ml去离子水，摇荡三角烧瓶使NaOH固体充分溶解

⑶加去离子水将溶液定容到100ml

⑷高压灭菌后，室温保存。

4.2.2 、 配制NaOH溶液

⑴用100ml量桶准确取80ml去离子水，置于250ml三角烧瓶中。

⑵用天平称取8克NaOH固体缓缓加入三角烧瓶中。

⑶摇荡混匀溶液。用去离子水将溶液体积定容到100ml。

⑷将混匀的溶液转移入玻璃瓶中，室温保存。

4.2.3 、 配制NaCL溶液

⑴用天平称取292.2克NaCL固体置于1L烧杯中，加入800ml的去离子水后搅拌溶解。

⑵加去离子水将溶液定容至1L，适量分成小份。

⑶高压灭菌后，4 0 C 保存。

4.2.4 、 配制 Solution Ⅰ 溶液

（1） 量取1M Tris-HCL(ph8.0) 25ml ,1.5M EDTA(ph8.0) 20ml , 20 %Glucose(1.11M) 45ml, dH 2 O 910ml , 置于1L烧杯中。

（2） 高温高压灭菌后，4 0 C 保存。

（3） 使用前每50 ml的 Solution Ⅰ 加入2 ml 的RNaseA（20mg / ml).

4.2.5 、 配制 Solution Ⅱ 溶液

(1) 量取10 %SDS 50 ml, 2N NAOH 50 ml, 置于500 ml 烧杯中。

(2) 加灭菌水定容至 500 ml,充分混匀。

(3) 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

4.2.6 、 配制 Solution Ⅲ 溶液

（1） 称量KOAc 147g, CH 3 COOH 57.5g， 置于500 ml 烧杯中。

（2） 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

（3） 加去离子水将溶液定容 至 500 ml。

（4） 高温高压灭菌后，4 0 C 保存。

4.2.7 、 配制 LB培养基

（1） 称取T ryptone 10g, Yeast Extract 5g, NaCl 10g， 置于1L烧杯中。

（2） 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

（3） 滴加5 N NAOH（约0.2ml），调节ph值至7.0。

（4） 加去离子水将培养基 定容 至 1L。

（5） 高温高压灭菌后，4 0 C 保存。

4.2.8 配制 1M Tris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)

（1） 称量121.1g Tris置于1L烧杯.

（2） 加入约800ml的去离子水。充分搅拌溶解。

（3） 按下加入70ml pH7.4, 60 pH7.6,42ml pH8.0浓盐酸调节所需要的值。

（4） 将溶液定容至1L。

（5） 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：使溶液冷却至室温后在调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的值大约降低0.03个单位。

4.2.9 、 配制1L 10 ×TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mM Tris-HCl,10mM EDTA

（1）量取溶液1M Tris-HClBuffer(pH7.4,,7.6,8.0)100ml,500mM EDTA(pH 8.0) 20ml，置于1烧杯中。

（2）向烧杯中加入800ml的去离子水，均匀混合。

（3）将溶液定溶至1L后，高温高压灭菌。

（4）室温保存.

4.3.10 、 配制 1L 10 × PBS Buffer 1370mM NaCl, 27mM KCl,10mM Na 2 HPO 4 ,20mM KH 2 PO 4 .

（1）称量NaCl 80g , KCl 2,Na 2 HPO 4 14.2g , KH 2 PO 4 ,2.7g 置于1L烧杯中。

（2） 向烧杯中加入800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

（3）滴加HCl将pH值调节至 7.4 ，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

（4）高温高压灭菌，室温保存。

注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需可在配方中补充1mM CaCl 2 和0.5mM MgCl 2 。

4.3.11 配制 苯酚/ 氯仿/ 异戊醇 （25：24：1）

（1）说明：从核酸除去蛋白质常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机向的分离，而异戊醇有助于消除抽屉过程中出现的气泡。

（2）配置方法：将平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合和后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

4.3.12 配制 10%（W/V ）SDS 100ml

（1）称量10g高重度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约800ml的去离子水，68℃加热溶解。

（2）滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2.

（3）将溶液定容至100ml后，室温保存。

4.3.13 、 配制 1L 0.5M EDTA(pH 8.0)

（1）称取186.1gNa 2 EDTA.2H 2 O，置于1L烧杯中。

(2）加入800ml去离子水，充分搅拌。

(3）用NaOH调节pH值至8.0（约20g NOH） 注意：pH值至8.0时才能完全溶解。

（4）加去离子水将溶液定容至1L.

(5)适量分成小分后，高温高压灭菌。

（6）室温保存。

4.3.14 配制 1L 50 ×TAE BUffer (pH8.5) 2M Tris 醋酸,100mMEDTA

（1）称量试剂Tris 242g , Na 2 EDTA.2H 2 O 37.2g，置于1L烧杯中。

（2）向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌并溶解。

（3）加入57.1ml的醋酸，充分搅拌。

（4）家去离子水定容至1L后，室温保存。

4.3.15 、 配制 1L 20 ×SSC 3.0M NaCl, 03M 柠檬酸钠

（1）称量试剂NaCl 175.3g ,柠檬酸钠.2H 2 O 88.2g ，置于1L烧杯中。

（2）向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

（3） 滴加14 N HCl，调节pH值至7.0后，加去离子水定容至1L.

（4）高温高压灭菌后室温保存。

4.3.16 配制 100ml 预杂交液 /杂交液（DNA杂交用），6 ×SSC (或SSPE) ，5×Denhardts 0.5%(WV) SDS , 100μg / ml Salmon DNA

（1）称量试剂 30ml 20 ×SSC (或SSPE),10ml 50×Denhardts, 5ml 10 % SDS, 1ml 10μg / ml Salmon DNA,54m dl2H 2 O ，置于200ml烧杯中。

（2）充分混匀后，使用0.45 μm 滤膜滤去杂质后使用。

4.3.17 、 配制 100ml 封闭缓冲液（Wester杂交） 5%(W/V)脱脂奶粉 TBST BUffer

（1）称量5g脱脂奶粉加入到100ml的TBST Buffer中，充分搅拌溶解。

（2）24℃保存待用（本封闭液应现配现用）。