32P 结合至合成肽的量计算AM PK 活力的具体步骤

问：哪位知道根据32P 结合至合成肽的量计算AM PK 活力的具体步骤啊？我做的是骨骼肌，知道需要多少含量的骨骼肌，麻烦把详细的步骤告知，谢谢。

答：AMPK是一个蛋白激酶（protein kinase）吗？合成肽就是这个激酶的底物吧？如果是这样的话，您可以参看PKC激酶的测定protocol，很多公司比如sigma都有。（请参看附件，上面有详细的介绍和计算公式）。至于操作过程，简单的说，就是在反应中加入ATP和32P标记的ATP，当然这个体系中有AMPK和合成肽。然后取固定体积点到P81膜上，磷酸终止反应，乙醇漂洗，液闪计数确定活力。

激酶活性算法.pdf