人慢性髓系白血病细胞(K562)
人慢性髓系白血病细胞(K562)介绍:人慢性髓系白血病细胞(K562)是由Lozzio 从一名53 岁的慢性髓细胞性白血病急变期的女性患者的胸水中分离建立的。该细胞曾被认为来源于粒系,处于高度未分化阶段;Anderson等人作了细胞膜特性的研究后,认为该细胞是红白血病细胞系。该细胞是对自然杀伤细胞高度敏感的体外靶标,故而被广泛应用于这方面的研究。K562 的原始细胞是一种具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞,能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。该细胞表达CD7(25%)。
人慢性髓系白血病细胞(K562)特性:
1) 来源:骨髓
2) 形态:淋巴母细胞样;圆形,悬浮生长
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25 瓶或者1mL 冻存管包装
运输和保存:使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后,可在1000RPM,常温条件下,离心5min 后,于洁净操作台弃去上清,加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
人慢性髓系白血病细胞(K562)用途:仅供科研使用。
人慢性髓系白血病细胞(K562)培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠0.11g/L),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37 摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm 皿中,加入约8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2 到1:5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2 到1:3 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM 条件下离心4 分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。