人肺腺癌细胞（NCI-H441）

人肺腺癌细胞（NCI-H441）介绍：

人肺腺癌细胞（NCI-H441）于1982年取自一位男性肺乳头状腺癌患者的心包夜，该细胞系表达主要表面活性剂的脱辅基蛋白（SP-A）的mRNA和蛋白质。电子显微镜显示细胞多层薄片状和细胞质结构类似无纤毛分泌细胞颗粒。细胞可以在含或不含血清软琼脂克隆。

人肺腺癌细胞（NCI-H441）特性：

1） 来源：人肺

2） 形态：上皮细胞样，贴璧生长

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T75瓶或者1mL冻存管包装

人肺腺癌细胞（NCI-H441）运输和保存：

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。     

人肺腺癌细胞（NCI-H441）培养步骤

一．人肺腺癌细胞（NCI-H441）培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备RPMI-1640 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二．细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL 培养基的15ml 离心管中混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，加入1mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml 培养基的培养瓶中培养过夜。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml 此细胞的培养基终止消化。

3. 轻轻吹打后吸出，移入15ml 离心管中，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，加入1mL 培养液后吹匀。

4. 移入到事先准备好的含有5ml 培养基的T-25 培养瓶中或含有14ml 培养基的T-75 培养瓶中培养。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3 步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO 后迅速混匀，按每1ml 的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。

注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。