二．使用方法

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出细胞培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时以稳定细胞状态，然后离心换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

待细胞达到一定密度（不超过1x10^6/ml）可按照以下方法换液培养或传代。

方法①：收集细胞，1000rpm离心5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法②：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

贴壁细胞需要用胰酶进行消化。

3、细胞冻存：

1）将细胞悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

2）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

3）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

4、细胞复苏： 1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2）将冻存管中的细胞移至含10ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

注：培养瓶内非完全培养基，请务必使用准备好的新鲜培养基。悬浮细胞运输中会有少些细胞因为碰撞裂解产生碎片，收到细胞如碎片较多时，胎牛血清可以用15%培养三天，利于细胞尽快恢复状态，细胞稳定后再调回10%即可。