噬菌体效价实验

一、实验材料：

菌株λ噬菌体溶原株 ：Escherichia coli K12 WK 6 λ

λ噬菌体敏感株：Escherichia coli  C600 CR34

培养基：肉汤培养基；软琼脂：肉汤培养基中加入0.5%琼脂10ml/管

培养条件： NA培养基或LB培养基，37℃

二、实验步骤：

1.7.5ml 新鲜E.coli λ 菌液离心

2.菌沉淀用1ml无菌水悬浮

3. 菌悬液加在无菌平皿中央，开皿盖，在安全柜的紫外灯下照射15秒（0.15mJ/cm2）

4.加入NA培养液5ml

5.37℃暗培养3小时

6.吸取以上菌液-培养液混合物，加1 - 0.5ml氯仿震荡后离心12000rpm2分钟

7.上清十倍稀释至10-7

8.选择10-5、10-6、10-7上清稀释液100ul 与100ul受体菌（CCTCC AB 2013330）混合

9.37℃温浴20分钟

10.混合菌液加入到NA软琼脂（不烫手）中震荡混匀倒NA平板

三、实验结果：

1.稀释度为10-4的平板：布满噬斑不可数

2.稀释度为10-5的平板：噬斑346个

3.稀释度为10-6的平板：噬斑37个

4.稀释度为10-7的平板：噬斑4个

 四、实验建议：

1.噬菌体液体放置在室温下两周会导致数量下降一个数量级。

2.宿主菌必须是噬菌体敏感菌株CCTCC AB 2013330，教学用普通大肠菌和噬菌体溶原菌株不能产生噬菌斑。

3.琼脂的浓度（1.5%-2.0%），过高或过低的琼脂含量均不能达到好的效果。

4.噬菌体与细胞的比例，测定噬菌体效价应采用低感染复数。

5.指示菌密度是在平板上获得清晰噬菌斑效果的重要因素之一，其细胞密度不宜过高。一般控制在1ⅹ107个细胞/ml为宜。

图1. 上一排为平板背面照片，下一排为平板正面照片。