维生素 B2 (核黄素) 荧光测定法实验-荧光测定法2

核黄素在pH 4～9 的条件下，用450 nm波长的光激发，可发出波长为520 nm的荧光。在核黄素的含量为0.1～10 μg范围内，荧光的强度，与核黄素浓度成正比，硫代硫酸钠可消除核黄素的荧光性。

材料与仪器

核黄素
荧光红钠 硫代硫酸钠 盐酸
荧光分光光度计 容量瓶

步骤

溶液配制：
1. 标准核黄素溶液：1.0 μg/ml。
2. 样品液：含核黄素0.01～10 μg/ml。
3. 荧光红钠溶液：5 μg/ml。
4. 荧光消光剂：0.2 g硫代硫酸钠,加水溶解至10 ml。
操作步骤：
 1. 仪器定位：在每次测定前，均需用荧光红钠溶液作为标准对荧光分光光度计定位。调好激发波长450 nm，荧光波长520 nm。调好荧光强度为100。
2. 标准核黄素荧光测定：吸取样品液10 ml，加入标准核黄素溶液1 ml，用0.1 mol/L盐酸调至pH 5.0，测定荧光强度为A。
3. 样品荧光强度测定：各吸取10 ml样品液于试管中，分别加入1 ml蒸馏水和1 ml消光剂溶液。用0.1 mol/L盐酸调至pH 5.0，于荧光光度计中测定各自的荧光强度。加水者为B，加消光剂者为C。
4 . 计算