锂-匹罗卡品大鼠癫病模型制作实验-基本方案
原理
材料与仪器
成年SD大鼠(200-250g)氯化锂 匹罗卡品 溴甲基东莨菪碱 苯巴比妥钠注射液 0.9%生理盐水
注射器
步骤
1.按照预计实验动物数估算所需各种药品的总需要量,分别称取总需要量的溴甲基东莨菪碱、氯化锂和匹罗卡品,用0.9%生理盐水(需过滤)将实验药品溶解为工作浓度。
2建模前1d,氯化锂3mmol/kg腹腔注射。
3.氯化锂注射后18-20h,皮下注射溴甲基东莨菪碱1mg/kg,并记录给药时间。
4.30min后给予首剂匹罗卡品30mg/kg腹腔注射,观察大鼠癫痫样发作程度。此后每隔30min给予10mg/kg追加剂量腹腔注射,直至出现Ⅳ级以上无明显间歇的SE样发作(见结果判读)。极量为60mg/kg。
5.SE后1h,注射苯巴比妥钠40mg/kg终止发作。
6.注射苯巴比妥钠30min后给予皮下注射生理盐水10ml,用以补充建模过程中所致的体液损失。
7.结果判读:
(1)模型分级标准:大鼠癫病发作症状采用Racine分级标准:
①0级无任何反应;②Ⅰ级面部阵挛,包括眨眼、动须、节奏性咀嚼等;③Ⅱ级:Ⅰ级加节律性点头;④Ⅲ级:Ⅱ级加前肢肌阵挛,但无后肢直立位;⑤Ⅳ级:Ⅲ级加后肢直立位;⑥Ⅴ级全面性强直-阵挛发作,并失去体位控制。实验动物出现连续1h的Ⅳ级及以上程度发作,可判定为建模成功。:
(2)癫病模型分期:本癫痫模型在时间上主要分为三个时期:
①急性期Pilocar-pine注射后几分钟至1h内发生并持续约24h的SE状态,此状态以强直-阵挛全身性发作为特征;
②潜伏期在SE之后,发作得到缓和,几乎没有癫病发作,又称为沉默期,可持续1周至数周;
③慢性癫痫期 在潜伏期之后,以反复性自发癫痫发作(SRSs)为特征,平均每周发作2-3次。脑电图表现:①急性期可见海马区出现显著的0节律和皮层的低压快速电活动,并在海马发展成为带有棘波的高压快速电活动;②在潜伏期显示出正常的EEG活动;③慢性期,初始的SRSs常以无皮层记录改变的阵发性海马发放为特征,其后逐步演变为分级的皮层、海马同步化发放。
注意事项
1.匹罗卡品需在建模前新鲜配制,使用过程中避光存放,以确保药效。
2.小鼠程序同大鼠,所选动物体重范围20-25g。以C57BL/6小鼠为例,建模药物剂量为氯化锂10mmol/kg,匹罗卡品100mg/kg。
3.若匹罗卡品注射已达极最,大鼠仍未出现Ⅳ级及以上程度发作,则可认为建模失败。
常见问题
1.建模过程中,若见大鼠出现间断性IV级发作,伴有持续的Ⅲ级发作,且发作过程中无明确的自主爬行及摸索动作,也可判定为符合模型标准。
2.笔者曾在大鼠出现Ⅲ级发作时及时应用苯巴比妥钠终止发作,建立轻度癫病发作模型,组织学染色证实大鼠海马区出现不同于SE后的病理学改变。
3.大鼠在建模成功后1周内因频繁癫痫发作,死亡率较高。可每天给予5%葡萄糖氯化钠3-5ml腹腔注射,2/d,加强能量供给。