二氨基己基间隔物的结合实验

步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

连接间隔物的步骤与连接蛋白质相同（见「蛋白质与溴化氰活化的琼脂糖结合」），只是用 1 mg/ml（描述步骤用 20 mg/20 ml）1，6-己二胺代替蛋白质。用 0.5 mol/L NaCl 洗掉己基衍生物（AH-琼脂糖）

为将蛋白质连接在间隔物上，需用 1 mol/L HCl 将 pH 调节到 4.5。随后加入 N-乙基-N'-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（10 mg/ml 胶）和蛋白质（10 mg/ml）。最终 pH 必须保持 4.5。将混合物 4℃ 振荡过夜（1 h 后调整 pH）。最后用 0.1 mol/L pH 7.6 磷酸二氢钾冲洗凝胶。

常见问题

试剂：

0.1 mol/L pH 7.6 磷酸二氢钾

1，6-己二胺（Mr＝116.2）

0.5 mol/L NaCl（Mr＝58.4；2.92 g/100 ml）

N-乙基-N'-（3-二甲氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl，Mr＝191.7）

1 mol/L HCl