皂苷的鉴别-比色法

皂苷别称碱皂体;皂素；皂甙；皂角苷；或皂草苷。皂苷是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷，主要分布于陆地高等植物中，也少量存在于海星和海参等海洋生物中。 许多中草药如人参、远志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。有些皂苷还具有抗菌的活性或解热、镇静、抗癌等有价值的生物活性。

材料与仪器

皂角
蒸馏水 醋酐 浓硫酸 氯仿
试管 烧杯 水浴锅 分液漏斗 锥形瓶 滤纸 载玻片 酒精灯 蒸发皿 比色盘

步骤

1.检品溶液的制备：

（1）取皂角碎块1g于大试管（或小烧杯）中，加蒸馏水15ml，于30-90°水浴上浸渍15分钟后过滤，滤液供鉴别用。

（2）取薯蓣碎块0.5g加上法同样制备得薯蓣水浸液。

（3）取薯蓣碎块0.5g于大试管或小锥形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上温浸15分钟，滤液供鉴别。

2.鉴别试验：

（1）溶血试验：取滤纸片一小块，于小心处滴加皂角浸液一滴，待干后于同处再滴加一滴，如是反复操作至滴加数滴，干燥后无喷雾血球试液（取牛血、羊血或兔血一份，用玻棒或棉签搅和，除去凝集的血蛋白，加pH7.4磷酸盐缓冲液一份稀释即得），数分钟后观察在红色的背底中是否出现无红色的黄色（或透明）斑点（中心处皂解浸液原点）。（本反应亦可在试管中进行，血球试液中草药浸液中的皂苷溶解后，血球液由浑浊变为澄明。此外还可在载玻片上进行，并在显微镜下观察血球破裂溶解前后的状况）。

（2）泡沫试验：薯蓣浸液，皂角浸液各2ml，分别置于试管中。用力振摇一分钟后放置，在10分钟内观察二管是否都有持久性泡沫产生？

（3）醋酐浓硫酸试验（Liebermann-Burchard反应），皂角浸液5ml，于蒸发皿中在水浴上蒸干，加入1ml醋酐使其溶解，滴于干燥比色盘中，从边沿缓缓滴加浓硫酸1滴，观察颜色变化。另取薯蓣浸液5ml，置于蒸发皿中，在水浴上蒸干，加入1ml醋酐溶液，并倾入比色盘中，（试管）沿管壁加入几滴浓硫酸，观察界面间是否有紫红色环产生？

（4）氯仿-浓硫酸试验（Salkowski反应）：取薯蓣醇浸液2ml，在水浴上蒸干，有氯仿1ml溶解，转入干燥小试管中，沿壁小心加浓硫酸1ml，氯仿层显红或兰色，硫酸层有绿色荧光，示含甾体皂苷。

注意事项

采用比色法测定总皂苷含量时，标准品可以选择两种或两种以上进行结果对比，取二者的平均值作为最终测定结果，使结果更具有意义。测定回收率时，也可以选择两种或两种以上标准品进行对比检测。

常见问题

试验的操作采用比色法，并选择酶标仪处理数据，操作简便快捷，线性关系良好，并减少了用紫外分光光度计法操作时的大量时间，降低了时间对显色结果的影响，稳定性、精密度、重复性及回收率均达到标准要求。
来源于《不同人参皂苷为标准品测定皂苷含量的比较研究》食品工业。