水、电解质代谢紊乱相关实验-家兔实验性肺水肿模型

肺水肿是临床上常见的危重症之一，肺水肿是指过多的液体积聚在肺间质或溢入肺泡腔内的病理状态，其发展顺序常为水肿液先在组织间隙中积聚，形成间质性肺水肿，然后发展为肺泡性肺水肿。肺水肿的发病原因很多，最常见于急性左心衰竭，如心功能不全患者过快、过多的输液会引起肺水肿。慢性肺水肿常为间质性肺水肿，急性肺水肿常为肺泡性肺水肿。肺水肿按发病机制可分为压力性肺水肿、通透性肺水肿和混合性肺水肿。压力性肺水肿是由于肺毛细血管有效滤过压增高所致，通透性肺水肿是因为肺毛细血管壁通透性增高所致，混合性肺水肿的发生与有效滤过压增高和肺毛细血管壁通透性增高有关。

原理

家兔实验性肺水肿的基本原理是通过大量滴注生理盐水并静脉注射肾上腺素导致急性心源性肺泡性肺水肿。大量滴注生理盐水增加血容量从而使回心血量增多，肾上腺素引起外周血管广泛收缩，血液由体循环急速转移到肺循环，结果使左心房压力和肺毛细血管有效滤过压增高，液体流入肺间质空隙增多而出现肺水肿。

用途

家兔实验性肺水肿可以观察急性肺水肿的表现及其病理过程、结合理论知识分析肺水肿的发生机制、探讨急性肺水肿的治疗方案。

材料与仪器

器材：

① 计算机和 BL－420 生物机能实验系统、张力换能器

② 动、静脉插管、三通管

③ 输液装置、气管插管

④ 婴儿秤、天平

⑤ 手术器械（手术刀、手术剪、剪毛剪、眼科剪刀、眼科镊子、止血钳）

⑥ 听诊器、烧杯

⑦ 纱布、线、滤纸

⑧ 兔固定台

⑨ 恒温水浴箱

⑩ 注射器（1 mL、2 mL、5 mL、10 mL）

试剂：

① 3％ 戊巴比妥钠或 20％ 氨基甲酸乙酯（乌拉坦）

② 生理盐水

③ 0.1％ 肾上腺素

步骤

家兔实验性肺水肿的基本过程可分为如下几步：

（一）麻醉和固定动物

家兔称重后，拔去耳背面外侧缘的兔毛（或用水湿润局部），使静脉血管充盈、扩张，便于穿刺进针。左手拇指和无名指固定兔耳远端，食指和中指捏住近心端，右手持注射器以 15°～20° 角刺入血管（尽量从远心端开始），当回抽有血或阻力小时，可推进注射器，经耳缘静脉缓慢注入 3％ 戊巴比妥钠（1 mL/kg）或 20％ 氨基甲酸乙酯（4 mL/kg）进行全身麻醉，随后将兔仰卧于兔固定台上，四肢夹于兔固定台四个兔夹上，细线挂其门牙以固定头部。

（二）气管插管

颈部正中剪毛，以甲状软骨为标志，在颈前正中纵向切开皮下约 5 cm，钝性分离肌肉，纵向切开气管前筋膜，充分暴露气管后，穿线备用。在甲状软骨下第 3、4 环状软骨之间做一横形切口（1/3～1/2 气管周长），再向头端做一纵形切口，使成倒「T」形。气管插管斜面向下，从切口处向肺脏方向插入，用棉线结扎固定，并用线的残端扎于气管插管分叉处，以防脱落。

（三）颈外静脉插管

左手食指及拇指捏住切口右侧皮肤，将皮下浅层肌肉向内侧轻拉，可看到右侧颈外静脉，用玻璃分针或止血钳将其分离出来 1～2 cm，穿两线备用，提起颈外静脉近心端，待静脉充盈后再结扎远心端，在静脉上靠近远心端结扎线处用眼科剪刀成 45° 角剪一小口（1/3～1/2 血管周长），将事先与输液管和输液瓶连接好并充满生理盐水的插管插入，结扎和二次结扎固定好，打开静脉输液装置进行输液，缓慢输入生理盐水（5～10 滴/分）以保持输液管通畅。

（四）呼吸描记

在胸腹部呼吸起伏幅度最大处用缝皮针缝一长丝线，打结固定后将丝线固定在张力换能器上（线的松、紧适中），打开 BL－420 生物机能实验系统，在动物安静 5 min 后开始观察并记录动物正常呼吸，并用听诊器听肺部的呼吸音。

（五）模型制备与治疗

各组家兔经静脉导管输入 37 ℃ 生理盐水，输入总量按 100 mL/kg 计算，输液速度为 180～200 滴/分，待滴注接近完毕时，进行以下操作：①模型组家兔经三通管推注 0.1％ 肾上腺素（0.6 mL/kg）后继续滴注剩余的生理盐水；②治疗组家兔推注 0.1％ 肾上腺素（0.6 mL/kg）后立即按 20 mg/kg 的量静脉注射 0.5％ 山莨菪碱注射液，然后继续滴注剩余的生理盐水；③正常对照组家兔只单纯滴注生理盐水，不加肾上腺素或山莨菪碱。

（六）观察指标

实验过程中，密切观察呼吸及一般情况的改变，主要有：①口唇黏膜颜色，有无紫绀现象；②呼吸频率和深度；③用听诊器听取肺底部有无湿性啰音、水泡音的出现；④气管插管中否有粉红色泡沫状液体溢出。

（七）取出肺脏

死亡动物记录死亡时间，存活动物于用药后 30 min 用止血钳夹闭气管处死。所有家兔均打开胸腔暴露肺脏，用线在气管分叉处结扎以防止肺水肿液流出，在结扎处以上切断气管，小心将心脏及其血管分离（勿损伤肺），把肺取出，用滤纸吸去肺表面的水分后称取肺重量，计算肺系数，肺系数 ＝ 肺重量(g)/体重(kg)，正常家兔肺系数为 4～5，然后肉眼观察肺大体改变，切开肺脏观察切面的改变，注意有无泡沫状液体流出。

注意事项

（1）忌用实验前已有肺部异样征象的家兔，以免影响实验观察。

（2）麻醉期间注意观察家兔肌张力、呼吸频率和角膜反射的变化，防止麻醉过深或过浅。

（3）气管插管之前，最好检查一下气管内有无出血或分泌物，如有应先将出血或分泌物清理或抽吸干净，再插管，否则容易在气管内阻塞而影响实验指标的观察。

（4）不可过猛牵拉张力换能器的弹簧片，以免损坏张力换能器。

（5）模型组、治疗组和正常对照组的输液速度应基本一致，输液不要太快，以控制在 180～200 滴/分为宜。

（6）动物对注入肾上腺素的耐受性个体差异较大，有些动物需注入较多量的肾上腺素才出现急性肺水肿。

（7）解剖取肺脏时，注意勿损伤肺表面和挤压肺组织，以防止水肿液流出，影响肺系数值。