葡萄膜炎动物模型-过继转移诱导葡萄膜炎动物模型法

DCs 诱导方法建立 EAU 模型。
分离 7 天龄的 B10.RⅢ 鼠脾脏单个细胞，红细胞裂解液裂解红细胞后，加人 Fc 阻断抗体孵育以阻断 Fc 的干扰，然后应用抗 CDIIc+ 免疫磁珠阳性筛选并纯化 CDIIc + 细胞，使之纯度达 99% 以上，将纯化的 CDIIc+ 细胞应用 100ug/ml 的 IRBP161-180 抗原肽联合 1ug/ml 的 LPS 诱导 DC 成熟。最后，取诱导成熟后的（1～2）x 106 个 DC 注射至 B10.RⅢ 鼠足垫部皮下，免疫后 4 天再重复注射一次。

原理

葡萄膜炎的发生与专职呈递抗原树突状细胞（dendritic cells，DCs）刺激 Naïve T 细胞或效应性 T 细胞的过度激活有关。源于诱导的 EAU 模型动物的效应性 T 细胞，能够将疾病过继转移给遗体背景一致的 Naive 动物，从而诱导出葡萄膜炎，也可将经由病原体脉冲成熟后的 DCs 注射至遗体背景一致的动物引起 Naive 动物的葡萄膜炎。

用途

此模型是将经特异性抗原脉冲成熟的 DC 注射至遗传背景兼容的敏感动物体内建立的 EAU 模型，是由单一的效应机制所驱动，因此适用于疾病的效应性机制研究。此模型的效应表型受免疫系统首次识别的自身抗原所影响，因此可模拟遗传背景一致患者的不同临床特征和免疫表现，为人类葡萄膜炎的异质性研究提供新的思路。

材料与仪器

实验对象：
7 天龄的 B10.RⅢ 鼠。
实验器材：
抗 CDIIc+ 免疫磁珠。
实验试剂：
① 红细胞裂解液；
② Fc 氟化液。

步骤

过继转移诱导葡萄膜炎动物模型法的基本过程可分为如下几步：A. 分离 7 天龄的 B10.RⅢ 鼠脾脏单个细胞，红细胞裂解液裂解红细胞后，加人 Fc 阻断抗体孵育以阻断 Fc 的干扰。B. 应用抗 CDIIc+ 免疫磁珠阳性筛选并纯化 CDIIc+细胞，使之纯度达 99% 以上，将纯化的 CDIIc+ 细胞应用 100ug/ml 的 IRBP161-180 抗原肽联合 1 ug/ml 的 LPS 诱导 DC 成熟。C. 取诱导成熟后的（1～2）x106 个 DC 注射至 B10.RIII 鼠足垫部皮下，免疫后 4 天再重复注射一次。

注意事项

DC 诱导的 EAU 模型炎症程度较轻，临床评分为 2 级，动物免疫 DC 后 7～11 天开始发病，在 14～18 天时，炎症达到高峰，之后逐渐消失。检眼镜检查出现局灶性浸润和脉络膜视网膜白色损伤，组织学病变特点表现：后极部炎症，包括以粒细胞为主的炎症细胞浸润，视网膜折叠以及少量浆液性脱落。