人源化乙肝感染小鼠模型-人源化Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠模型

人源化乙肝感染小鼠模型是为了在体研究人的复杂生命过程而发展起来的重要研究工具,为研究人的病原体如HBV、HCV,HIV提供了绝佳的动物模型。

人源化小鼠常用免疫缺陷的肝损伤动物模型。

其中,uPA小鼠模型采用白蛋白启动子控制下肝细胞靶向表达高毒性的uPA基因的方法造成小鼠肝组织的损伤,人源化uPA小鼠能达到70% 的人肝嵌合,但该小鼠的应用因为高致死率、低繁殖率以及狭窄的移植时间窗而受到局限。

Fah基因敲除小鼠(模拟人类酪氨酸代谢缺陷疾病小鼠)是近年来新发展起来的肝损伤动物模型。

原理

Fah基因敲除小鼠(模拟人类酪氨酸代谢缺陷疾病小鼠)的自体肝细胞会发生进行性、不可逆转的损伤，且这种肝损伤可通过药物NTBC进行选择性控制；同时Rag2-/-II2rg-/-联合缺陷的小鼠,其T、B细胞及自然杀伤细胞发育受阻.对植人的人肝细胞不发生免疫排斥。

因此,免疫缺陷的Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠移植的人肝细胞能获得生长优势,人肝嵌合率可高达95% 。已报道人肝嵌合的Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠能感染HBV和HCV。

用途

可用于HBV感染的致病机制药物筛选及治疗性疫苗研究。

材料与仪器

对象：雄性Fah-/-小鼠和雌性Rag2-/-II2rg-/-小鼠、人肝组织样本。

器材：PCR仪、ELISA检测试剂盒。

试剂：相关基因工程酶。

步骤

人源化Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠模型的基本过程可分为如下几步：

（一）流程一

A.雄性Fah-/-小鼠与雌性Rag2-/-II2rg-/-小鼠杂交,基因型分析筛选Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠。

B.小鼠自出生起每天在饮用水中加人药物NTBC,以控制肝损伤的发生。50只成年Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠准备进行人肝细胞移植。

C.收集10个供者的人肝组织样本,分离人肝细胞,低温保存备用。按每只小鼠(3-5)×106个人肝细胞的剂量经脾移植。

D.移植人肝细胞后,小鼠饮用水中的NTBC浓度逐步减少(25% ，12% ，6% 7.5 mg/ml,每种浓度间隔2天)。每周采血检测人肝细胞的嵌合度。检测方法采用人白蛋白的ELISA检测。

E.从HBV慢性感染患者的血清中分离HBV病毒,选择人肝嵌合度70% 以上的Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠,按每只小鼠1×108GE的病毒滴度尾静脉注射HBV病毒。

F.QPCR定量感染小鼠血清中HBV DNA及cccDNA，验证HBV感染人源化肝小鼠模型,准备后续研究。

注意事项

人源化Fah-/-Rag2-/-II2rg-/-小鼠模型的人肝嵌合度可达90% 以上,且能感染乙肝病毒,是用于乙肝病毒研究的理想动物模型,已在一些前沿研究工作中展示了巨大优势。

但由于该模型建模的技术难度高、模型维持成本高且无法繁殖,限制了其大规模的应用。