无菌小鼠人工哺乳-自动哺乳

自动哺乳，是第三军医大依据 Hall 等建立的大鼠自动哺乳方法改进，建立了适用于小鼠自动哺乳的方法。

材料与仪器

器材：

PE-0402 导管（内径 0.25 mm, 外径 0.4 mm)、PE-1104 导管（内径 0.4 mm, 外径 1.1 mm) 、酒精灯、护垫（厚约 0.02 mm, 直径 3 mm 的 PE 膜）、塑料卡、转换奶管、塑料盒

试剂：

蠕动泵、温湿棉球等。

①60Co（50 kGy）;

②植物油 ;

③人工乳。

步骤

自动哺乳的基本过程可分为如下几步：

A. 瘘管制备：将长 150 mm PE-0402 导管（内径 0.25 mm, 外径 0.4 mm) 一端在酒精灯外焰加热膨大（外径 0.6 mm）；将; PE-1104 导管（内径 0.4 mm, 外径 1.1 mm) 穿在保护垫（厚约 0.02 mm, 直径 3 mm 的 PE 膜）中央，拨出导丝即成瘘管。瘘管用塑料袋热封包装后 60Co 辐照 (50 kGy) 灭菌，备用。

B. 插导管：首先利用自制的灌胃针灌胃 0.04 ml 奶, 50 mm 的硅胶管（内径 0.3 mm，外径 0.61 mm) 表面涂上植物油，由小鼠口腔、食管、插入胃内，插入长度约 25 mm; 异氟烷麻醉小鼠，经导管将导丝（直径 0.275 mm, 长 53 mm,3 mm 处标记，植物油润滑）插入小鼠胃内；在小鼠腹腔内找到导管头部，推进导丝并同时退出导管，导丝在小鼠最后一根肋骨下缘 1.6 mm 处刺破胃壁和腹壁。

C. 造胃瘘：在导丝游离端套上瘘管非膨大端（植物油润滑）；从左侧腹壁端缓慢牵引自腹壁穿出的导丝，将瘘管导出腹壁，用 1 个自制的塑料卡子卡在瘘管上，固定瘘管；用导丝将转换奶管从小鼠左肩关节上缘刺入皮下，从右肩关节上缘穿出，将瘘管与转换奶管连接，从游离端牵引转换奶管将卡子卡在进入皮下处。

D. 乳鼠自动哺乳：将乳鼠置于单个隔离的堕料盒内, 温度控制在 35 °C 左右（无菌乳鼠喂养时，通过隔离器自带的温控系统进行温度控制），用蠕动泵将无菌奶泵入小鼠瘘管内，每 30 分钟一次，每日饲喂量为小鼠体重的 15%-20% 。每日早晚两次用温湿棉球为乳鼠擦拭身体，并按摩膀胱以帮助乳鼠顺利排尿。