制备转基因肿瘤动物

制备转基因肿瘤动物一般先获得和改建目的基因，将目的基因向生殖细胞高效转移、受精卵或胚胎组织在合适的环境中的发育，再筛选、鉴定稳定的转基因动物。

材料与仪器

器材：

显微操作仪

步骤

制备转基因肿瘤动物根据受体类型，分如下步骤：

（一）显微注射：

A、利用显微操作仪将体外构建的目的基因用极细的微吸管直接注射到处于原核时期的受精卵原核中，再将它植入假孕母鼠。

B、当受体胚胎在进行 DNA 合成或修复时，把外源基因整合到基因组中。

（二）逆转录病毒感染：

A、将外源 DNA 插入逆转录病毒的基因组中，制成高浓度病毒颗粒，通过病毒感染早期胚胎细胞，把外源基因整合到受体基因组中；

B、可以把载体病毒注入囊胚腔获得转基因动物；

C、也可直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层培养细胞共育。

（三）胚胎干细胞介导：

A、通常利用脂质体介导、电击或反转录病毒感染等，将外源基因导入干细胞中；

B、再移入胚泡期的宿主胚胎，最后将宿主胚胎移植到假孕母鼠子官内；

C、便可获得由胚胎干细胞介导的转基因动物。

（四）精子载体：

A、将成熟的精子与外源 DNA 进行预培养；

B、通过电穿孔或脂质体介导等方法，使精子有能力携带外源 DNA，并进入卵中使之受精；

C、使外源 DNA 整合到染色体中。

（五）体细胞核移植：

A、将外源目的的基因通过脂质体介导等方法转染动物体细胞、选择整合有外源目的基因的体细胞作为核供体。

B、将供体核移植入去核印母细胞。

（六）基因敲除：

A、根据同源重组原理，将外源 DNA 转入细胞与内源染色体上的一段特定的同源序列发生重组，达到改造基因组的目的。