《核酸提取技术》相关实验技术----DNA提取

DNA 提 取过 程 及原 理一 、实 验原 理

从 细胞中分离得到的 DNA 是与蛋白质结合的 DNA, 其中 还含 有大世 RNA, 即核糖核

蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。

盐溶法是提取 DNA 的常规技术之 一。在制备核酸时，通 常 是 用 研 磨 破 坏 细 胞 壁 和 细胞膜， 使核蛋白被释放出来。利用 DNA 不溶千 0.14mol/L 的 NaCl 溶液而 RNA 能溶于

0.14mol/L 的 NaCl 溶液这一性质可以将 DNA 核蛋白和 RNA 核蛋白从样品破碎细胞液中分开。

分 离 得 到 核 蛋 白 后 ，还需 进一步将蛋白等杂质 除 去。去 除蛋 白的方 法有 3 种： ＠ 用 含辛 醇 或 异 戊 醇 的 氯 仿 振 荡 核 蛋 白 溶 液 ， 使其乳化， 然 后离心除 去变 性蛋 白质。用这种 方法处理时， 蛋白质停 留在水相和氯仿相中间， 而 DNA 则溶千上层水相， 用 两倍 体积 95%乙醇溶液可将 DNA 钠盐沉淀出来。 用十二烧基硫酸钠(SOS)等去污剂使蛋白质变性， 从而使其与核酸分离， 也可 从材料 中直接提取出 DNA。用苯酚处理， 然后离心分层， 一样可以将 DNA 与蛋白质分 离开来。这时 DNA 溶于上层水相，蛋 白 变 性 后 则 停 留 在 酚层 内 ， 吸出上层水相， 加入两倍体积的 95%乙醇即可得到白色纤维状 DNA沉淀。反复  使用上述方法多次处理 DNA 核蛋白溶液 ，就能将蛋白等杂质较彻底 地除 去， 得到较纯的 DNA 制品。本实验采用 CTAB 法从植物幼苗中提取基因组 DNA。