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免疫技术

IgA的分离与提纯

2025-05-28 免疫技术 加入收藏
(一)材料与试剂配制 1.DEAE52纤维素 2.0.10Mol/L ZnSO4 液 ZnSO4 ·7H2 O 2.88g 加水至1 000.00ml 3.饱和

(一)材料与试剂配制 1.DEAE52纤维素 2.0.10Mol/L ZnSO4 液 ZnSO4 ·7H2 O 2.88g 加水至1 000.00ml 3.饱和硫酸铵溶液 4.10%EDTA—Na 5.SephadexG200 6.0.01Mol/L pH7.4PB液 7.0.10Mol/L pH6.4PB液 8.血清 (二)操作方法 1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4 液,调pH至7.0,室温搅拌1h,离心去沉淀。 2.于上清液中加入等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置30min或冰箱过夜。 3.10 000r/min离心10min,去上清。 4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。 5.生理盐水中透析除盐。 6.过DE52 柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱蛋白(IgG)弃去。 7.换用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脱,收集蛋白峰,即为IgA。 8.再过SephadexG200柱,洗液为0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl),收集洗脱液测OD280 值,取第一峰即为纯化IgA。 9.透析、浓缩、鉴定。

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