免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation)：蛋白定量技术

（一）双缩脲测定法

1 ．原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。此法特异性强，游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应，但此法不够敏感，仅能测出毫克水平。

2 ．试剂配制

硫酸铜（ CuSO4 · 5H2 O ） 1.50g

酒石酸钾钠 5.00g

H2 O 500.0ml

10 ％氢氧化钠（不含硫酸钠） 300ml

H2 O 加至 1 000ml

此溶液可长期保存，如产生暗红色沉淀，则应废弃重配。

3 ．标准曲线的制备

⑴ 准确称取牛血清白蛋白 1.0g （必要时须首先采用凯氏定氮法测定牛血清白蛋白制品中实际纯蛋白含量，然后换算），以生理盐水配成 1 ％的浓度。

⑵ 将 1 ％的牛血清白蛋白按表进行稀释：

表 牛血清白蛋白稀释方法表