Hoechst33258（或Hoechst33342）染色法检测细胞凋亡

Hoechst33258 （或Hoechst33342）染色法检测细胞凋亡

【材料与试剂】

Hoechst33258染液：称取Hoechst33258（或Hoechst33342）1mg，用20ml蒸馏水溶解，过滤，4℃避光保存。用时用蒸馏水10倍稀释成染色液，pH7.0。

固定液：4%多聚甲醛。

荧光显微镜。

【操作方法】

将制备好的石蜡切片按常规脱蜡、水化，用PBS洗5min；

或冰冻切片用冰丙酮固定15min，吹干，用PBS洗5min；

或细胞涂片或细胞甩片用0.1%多聚甲醛固定30min，用PBS洗5min；

将以上制备好的玻片，浸泡在装有Hoechst33258（或Hoechst33342）染液的染色缸中，避光作用10min；

封片。

【结果判断】

置于荧光显微镜下，选用340nm的激发光观察：在荧光显微镜下，活细胞呈弥散均匀荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。如果见到3个或3个以上的DNA荧光碎片被认为是凋亡细胞。