斑点杂交法测定培养细胞IL-2 mRNA的含量免疫测定

斑点杂交法测定培养细胞IL-2 mRNA的含量免疫测定   【试剂与仪器】 地高辛标记和检测试剂盒（Boerhinger Mannheim，No1093657） 【操作步骤】 （1）         杂交后彻底清洗，将膜置入清洗缓冲液中1～5min； （2）         100ml封闭缓冲液（1×）中封闭30min； （3）         抗地高辛-AP复合物（75mu/ml）用封闭缓冲液（1×）1：10000稀释； （4）         稀释的抗体溶液20ml与膜孵育30min； （5）         100ml清洗缓冲液中2次，每次15min； （6）         20ml测定缓冲液中平衡2～5min； （7）         将膜置入新鲜制备的20ml显色液中孵育5min(暗处，即避光)，显色过程中避免振动； （8）         数分钟显色沉淀开始形成，16h后反应完全，可短期在亮处观察显色情况； （9）         如果可见期望的斑点，加TE缓冲液50ml作用5min终止显色。     图像分析结果     采用MPIAS-500多媒体彩色图文分析系统，以0.758um波长取样。在1.715×105 um2 测量窗下测得各斑点的积分光密度值，以标准品的相应参数作图，查得各样本的数值，或将各组织分光密度值进行比较，得出样本相应mRNA含量。     也可以用其他型号的光密度扫描仪进行扫描，检测每点的光密度，与标准品光密度曲线比较，得出样本相应mRNA含量。