饱和硫酸铵盐析沉淀法纯化多克隆抗体

材料和试剂

1. 饱和硫酸铵(saturated ammonium sulfate，SAS)。

2. 透析袋。

3. PBS。

4. 高速低温离心机。

操作步骤

1. 待提取样品经4℃或室温离心13 000r/min(20000×g)，30min，收集上清；

2. 取上清约20ml与等体积生理盐水混合后，于搅拌下缓慢滴加40ml SAS，于4℃沉淀30min以上或过夜，使蛋白充分沉淀。

3. 13 000r/min，10min 4℃离心，弃上清。

4. 用12ml生理盐水溶解沉淀，同步骤（2）滴加8ml SAS，4℃1h。

5. 重复步骤（3）离心，用13.3ml生理盐水溶解沉淀，

6. 滴加6.6ml SAS，4℃1h；

7. 重复步骤（4）离心后所得沉淀物用少许盐水溶解沉淀，并装入透析袋。

8. 用大于20倍体积的PBS于4℃透析，更换透析液数次，可置-20℃保存或进一步纯化