免疫组化之二步法介绍

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二步法：EnVision System

EnVision显色系统是将二抗和酶通过一个多聚葡聚糖骨架联接成一个多聚体（即&NBS p;EnVision）直接放大信号40-50倍，把传统的二抗、三抗分别孵育合为一次孵育。特点：敏感、省时、方便、背景低（避免了内源性生物素干扰）。

EnVision工作程序：

1） 脱蜡、水化组织切片。 2） 预处理组织切片（据一抗具体说明而定） 3） 蒸馏水漂洗，置于TBS中。 4） 阻断内源性过氧化物酶（仅用于EnVisionTM/HRP） 5） 蒸馏水漂洗，置于TBS，10分钟 6） 一抗孵育10-30分钟 7） TBS漂洗10分钟 8） EnVisionTM孵育10-30分钟 9） TBS漂洗10分钟 10) 色源底物溶液孵育10分钟 11) 蒸馏水漂洗 12) 复染及封片

免疫 染色方法 The basic principles of ICC • 抗原 抗体反应 • 标记化学反应 • 呈色化学反应 要求 待检标本形态结构 和抗原 性保存良好, 抗原 不从原位扩散 或丢失

Specimen preparation 取材新鲜，固定及时，形态保存完好，抗原物质的抗原性不丢失、不扩散和被破坏 • Fixation • Sample Type Cryostat (frozen) sections Paraffin Sections Antigen Retrieval Techniques • Intention: To facilitate the immunological reaction of antibodies with antigens (increase reactivity of the majority of antigens) . Antibody Staining • Primary antibody may be directly labeled • labeled secondary antibody or more complex detection system. • secondary antibody against the immunoglobulins of the primary antibody source 减少或消除非特异性染色的方法 • 最常见原因 蛋白吸附于高电荷的胶原和结缔组织成分上