限制性酶及PCR的方法

限制性酶及PCR的方法     此法将MSRE和PCR技术的结合，大大提高了检测DNA甲基化的灵敏度。该法基于DNA经MSRE切割后，位于限制性位点侧翼的特异性引物仅能有效扩增那些甲基化而免于切割的DNA片段，但不能扩增未甲基化且遭受切割的DNA片段。本法定性只需0．6ngDNA，定量检测仅需50ngDNA，检出下限(指某一方法能检测到甲基化等位基因的拷贝数在整个DNA分子中所占的最小比例)约降低了100倍，且操作简便。但本法也同DNA印迹法一样，仅可监测甲基化敏感的限制性位点的CpG甲基化状态，对不完全限制和低水平甲基化等位基因无能为力，而且会出现如果限制性酶消化不完全时假阳性的结果。