免疫荧光单标检测

免疫荧光实验步骤

• 脱蜡至水

二甲苯Ⅰ(8min) 二甲苯Ⅱ(8min) 无水乙醇和二甲苯1:1(5min) 无水乙醇(3min) 95%乙醇(3min) 85%乙醇(3min) 75%乙醇(3min) PBS洗3遍

二．抗原修复柠檬酸钠抗原修复液修复。抗原修复100℃  20min  ;自然冷却至室温。三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS洗3遍。五．封闭  3-5%BSA或者1-2%FBS封闭30min六．除去封闭液液，每张切片加1滴或50μl的第一抗体， 4℃过夜。抗体稀释液：1%FBS溶液（可以加0.01%叠氮钠）七．洗一抗:PBS洗3遍，每次5min。八．孵二抗2h(室温)FITC标记山羊抗兔二抗;Cy3标记驴抗山羊二抗九．洗二抗   PBS洗3遍，每次5min十．擦干标本边缘水分，加DAPI（1ug/ml）5min;十一.PBS洗3遍，每遍3min，加mouting（sigma M1289）,盖盖玻片，指甲油封片。