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cDNA文库构建详细步骤
cDNA文库的构建分为六个阶段：阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链1．在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成：poly(A)+RN
2025-01-07 29 -
SDS-PAGE的主要应用有哪些？
SDS-PAGE原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液
2025-01-07 22 -
western-blot实验过程中常见问题及解答
常见问题解决对策 两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平玻璃没有洗干净，应该洗得很干净过硫酸铵和TEMED加量相对较多加完试剂后应摇匀 总是漏胶避免
2025-01-07 15 -
重叠延伸PCR实验
重叠延伸PCR实验重叠延伸PCR技术（gene splicing by overlap extension PCR，简称SOEPCR）由于采用具有互补末端的引物
2025-01-07 29 -
普通PCR的基本原理和注意事项
1、概述聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊D
2025-01-07 20 -
western-blot化学发光为什么会出现高背景？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会
2025-01-07 15 -
异丙醇法沉淀DNA
DNA 在含有异丙醇的溶液中比在含有乙醇的溶液中难溶。乙醇沉淀法需要2 ~ 3 倍体积的乙醇，异丙醇沉淀则需要0.6 ~ 0.7 倍的体积。沉淀大体积溶液中的D
2025-01-07 31 -
聚丙烯酰胺凝胶的配制
表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）溶液成分510152025304050
2025-01-07 16 -
大肠杆菌转化实验（热击法）
大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究
2025-01-07 25 -
如何对包涵体蛋白进行表达与复性
包涵体即在某些生长条件下，在重组蛋白的表达过程中缺乏某些蛋白质折叠的辅助因子或环境不适，无法形成正确的次级键等原因形成的。表达量越高越容易形成包涵体。原因可能是
2025-01-07 33 -
逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)
一、原理逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织
2025-01-07 24 -
启动子甲基化调控的miR-148a-3p通过靶向MAP3K9抑制肺腺癌的进展
非小细胞肺癌（NSCLC）占各种肺癌的85%。肺腺癌（LUAD）是NSCLC的主要亚型，其特点是高转移和高死亡率。NSCLC患者的低生存率主要是由于远处转移，占
2025-01-07 20 -
western-blot实验时，胶片上条带很弱怎么办？
条带弱的原因可能有以下几个方面：①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度
2025-01-07 17 -
实时荧光定量PCR实验步骤
1、样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈
2025-01-07 25 -
基因克隆连接到T载体是不是多此一举？
T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。我们都知道，做基因克隆目的基因连接到载体，使目的基因能够
2025-01-07 13
