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离子交换柱纯化蛋白的问题
采用离子交换柱纯化蛋白时,洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定,可以根据什么来调整洗脱时的离子强度?离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对
2024-11-26 51 -
关于柱层析的实验方法和技巧
常说的过柱子应该叫柱层析分离,也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多,所以下面我就几年来过柱的体会写些心得,希望能有所帮
2024-11-26 60 -
超滤原理和优缺点
超滤原理超滤(Ultrafiltration)技术是一种膜滤法,也有错流过滤(Cross Filtration)之称。它能从周围含有微粒的介质中分离出10~10
2024-11-26 114 -
超滤类型及其原理
超滤装置是在一个密闭的容器中进行,以压缩空气为动力,推动容器内的活塞前进,使样液形成内压,容器底部设有坚固的膜板。小于膜板孔径直径的小分子,受压力的作用被挤出膜
2024-11-26 58 -
磁性微球在蛋白质和多肽的分离与纯化上的应用
传统方法难以对蛋白质进行分离且保持其活性,但采用连在磁珠上的单克隆抗体进行免疫沉淀富集,SDS-PAGE电泳法检测则可达想要结果。用磁珠分离细胞溶菌液中的蛋白质
2024-11-26 64 -
蛋白质胶内酶解
从二维凝胶电泳到基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI―TOF―MS)需要有一个胶后处理系统,包括凝胶的图像扫描和分析、蛋白质斑点切割、酶解和MALD
2024-11-26 91 -
如何从脂肪组织中提取总蛋白?
从培养的细胞和组织中提取总蛋白是实验室非常常见的实验步骤,从大多数类型的细胞和组织中提取总蛋白比较容易,但是从脂肪组织中提取高质量和高浓度蛋白质是非常困难的。脂
2024-11-26 56 -
可溶性产物的纯化(融合T7·Tag的表达蛋白)
大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研
2024-11-26 47 -
直击膜蛋白分析全过程——从表达,纯化到结构分析
大约 30% 基因编码 MPs,膜蛋白占到新药物~50%的靶点。但MP’s 很难被成功表达,在成功解析出结构的蛋白中,只有<1%是膜蛋白。直击膜蛋白分析全
2024-11-26 41 -
蛋白质的提取和纯化--选择分离材料及预处理
蛋白质的提取和纯化--选择分离材料及预处理以蛋白质和结构与功能为基础,从分子水平上认识生命现象,已经成为现代生物学发展的主要方向,研究蛋白质,首先要得到高度纯化
2024-11-26 66 -
蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质提取与制备蛋白质种类很多,性质上的差异很大,既或是同类蛋白质,因选用材料不同,使用方法差别也很大,且又处于不同的体系中,因此不可能有一个固定的程序适用各类
2024-11-26 75 -
蛋白质抽取
蛋白质在细菌中表现后,以反复的冷冻-解冻方法打破细胞,再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来,此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。仪器用具:恒温震荡培养箱37℃;高
2024-11-26 52 -
提高超滤收率方法
当需要较高的收率时,尤其当研究的样品对象在微克范围时,建议应考虑以下几点:1.根据样品处理量,选择最小可用的超滤容器,在小容器中反复添加样品,反复超滤。2.在适
2024-11-26 186 -
蛋白质结构解析的方法简介
到目前为止,蛋白质结构解析的方法主要是两种,x射线衍射和NMR。近年来还出现了一种新的方法,叫做Electron Microscopy。其中X射线的方法产生的更
2024-11-26 62 -
电泳切胶小窍门
电泳切胶注意事项:1.电泳的buffer和gel都是新制的,切胶的台子清理干净,刀片最好洗净灭菌,总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。2.切胶是要把整
2024-11-26 56