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蛋白质的定量测定方法:微量凯氏定氮法
【 实验目的 】 学习凯氏定氮法的原理和操作技术。 【 实验原理 】 凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白
2024-11-25 76 -
微量凯氏(Micro-Kjeldahl)定氮法测定蛋白质含量
【实验原理】 蛋白质(或其它含氮有机化合物)与浓H2SO4共热时,其中碳、氢两种元素被氧化成CO2和H2O,而氮元素转变成NH3,并进一步与H2SO4反应生成(
2024-11-25 51 -
凯氏( Kjeldahl )微量定氮法测定血清蛋白质含量
【原理】 凯氏定氮法是蛋白质含量测定的经典方法,它是根据蛋白质分子中含氮量来测定的,各种蛋白质含氮量比较近似,平均约为 16 %,即 1g 氮相当于 6.25g
2024-11-25 66 -
western-blot实验方法
1、试剂耗材的准备:(1)转膜缓冲液(48 mM Tris-HCl,39 mM 甘氨酸,0.037% SDS,20%甲醇):(2)10 丽春红染液:(3)TB
2024-11-25 56 -
磷酸化蛋白的western blot之建议
1. 一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制剂,还要加入一定量的磷酸酶抑制剂,否则即使band压出来也会很浅,结果也不可信。2. 加一抗后最好4℃过夜
2024-11-25 208 -
Western Blot 常见问题分析
1. 在western实验中,通常有人采用TBS,有人采用PBS,在使用中有什么区别?答:选择合适的缓冲液对于维持一定PH值下蛋白质的稳定及保证实验的重复性是很
2024-11-25 107 -
Western Blot试剂的准备
1. 30%储备胶溶液: 丙烯酰胺(Acr) 29.0g 亚甲双丙烯酰胺(Bis) 1.0g 混匀后ddH2O,37℃溶解,定容至100m
2024-11-25 181 -
百奇生物的Western-Blotting方法
1. 溶液准备:转印缓冲液:0.025M Tris base , 0.192 M甘氨酸 , 30%甲醇10TBST:250mM Tris-HCl ( pH 8.
2024-11-25 51 -
电泳迁移实验(EMSA)方法
1. 探针的标记:(1) 如下设置探针标记的反应体系:待标记探针 (1.75pmol/微升) 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffe
2024-11-25 107 -
硝酸纤维素膜与PVDF膜的区别
1. 硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色
2024-11-25 86 -
多肽保存使用小常识
1.多肽保存多肽一般长期保存需要避光并应在-20℃以下,-80℃效果更好,短期可以保存在4℃。可以短时间以室温运输。多肽在-20℃或更低温度下很稳定,特别是冷冻
2024-11-25 99 -
Western blot 实验技术
1975年,Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法,称为Southern印迹法。而后人
2024-11-25 93 -
PAGE胶上蛋白质的银染方法
PAGE胶上蛋白质的银染方法有数百种,其原理相似,具体步骤各不相同。银染为蛋白质的非特异性染色,呈“爆炸性”反应模式,用于蛋白定量时准确性差,但其敏感度高、简便
2024-11-25 142 -
胶体电泳法方法步骤
SDS 平板胶片铸造︰1) 整理出两组玻璃片及白板铸胶组合,先用酒精拭净,并选择合适的间隔条(0.75 mm) 组合起来。请熟悉铸胶三明治组合的正确组装方式,以
2024-11-25 66 -
T7Select 噬菌体展示系统
T7Select™ 噬菌体展示系统是Novagen开发的基于T7噬菌体(而非传统的M13)创新的基因发现研究产品。目的序列(C-端)与T7基因10 衣壳蛋白而表
2024-11-25 158