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质粒DNA的去磷酸化实验
原理去除 5‘ 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中,DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的
2024-05-22 36 -
建立随机重叠 DNA 插入文库实验
材料与仪器乙酸铵 ATP 乙醇 甘油 蒸馏水 IPTG MgCl2 NaCl 酚 聚乙二醇 TE TM 缓冲液 Tris-HCl TTE 缓冲液 X-gal T
2024-05-22 26 -
向平末端DNA连接合成接头实验
原理接头是指合成的能够自身互补的 DNA 片段,一般长 8~16 个核苷酸,互补的片段复性后可形成平末端的含有一个酶切位点的双链分子。材料与仪器T4 噬菌体连接
2024-05-22 58 -
在低熔点琼脂糖中连接质粒和目的DNA实验
原理质粒克隆操作最费时间的步骤是用电泳的方法对预期大小的外源 DNA 片段和质粒 DNA 片段进行纯化,在以下的方案中(取自Struhl 1985),质粒和外源
2024-05-22 42 -
CTAB法(植物总 DNA 的快速少量抽提实验)
原理CTAB法:该方法简便、快速,DNA产量高(纯度稍次,适用于一般分子生物学操作)。 CTAB是一种非离子去污剂,植物材料在CTAB的处理下,结合65 C水浴
2024-05-22 45 -
总 DNA 质量检测及酶切实验
原理在pH值为8.0~8.3时,核酸分子碱基几乎不解离,磷酸全部解离,核酸分子带负电,在电泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为电泳支持物,在分子筛的作用下
2024-05-22 21 -
DNA 的琼脂糖凝胶电泳实验
原理DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理是利用DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时具有的电荷效应和分子筛效应。电荷效应是指DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电,在电场中
2024-05-22 39 -
常规方法(DNA片段的回收实验)
材料与仪器NA片段纯化试剂盒 异丙醇离心机 电泳仪 电泳槽 取液器 微量真空装置 抽滤装置步骤1. PAGE电泳,如EB染色的则在紫外灯下切下目的片断,如龈染
2024-05-22 19 -
液氮冻融法(DNA片段的回收实验)
材料与仪器DNA片段纯化试剂盒 异丙醇离心机 电泳仪 电泳槽 取液器 微量真空装置 抽滤装置步骤1. 紫外灯下从胶上切下目的片段,放入一Epphendof管中
2024-05-22 19 -
微量柱法(DNA 片段的回收实验)
材料与仪器DNA片段纯化试剂盒 异丙醇离心机 电泳仪 电泳槽 取液器 微量真空装置 抽滤装置步骤1. 紫外灯下从胶上切下目的片段,放入一Epphendof管中
2024-05-21 22 -
树脂回收法(DNA 片段的回收实验)
原理本方法特别适合于PCR片段的回收,具有纯度高、操作简洁等特点,经此方法回收的片段可有效的用于重组载体构建。通过15分钟的纯化过程,PCR产物即能被有效地从含
2024-05-21 21 -
DNA片断的酶切实验
原理酶切指采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。材料与仪器DNA片段TE缓冲液离心机 恒温水浴 取液器 电泳仪 电泳槽
2024-05-21 25 -
DNA结合蛋白测定实验
原理本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时,与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移
2024-05-21 23 -
鲑精担体 DNA 制备实验基本方案
材料与仪器鲑精DNATE 酚 氯仿 乙酸钠离心机 摇床 超声仪步骤1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中,至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用
2024-05-21 23 -
细胞质 S-100 组分的制备实验基本方案
材料与仪器细胞质KCl 高盐缓冲液透析膜 离心机步骤1. 测量细胞质提取物的体积,加入0.11倍体积的10细胞质提取缓冲液,充分混合。 100 000 g 离
2024-05-21 25