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通过杂交筛选未扩增的黏粒文库（滤膜影印）
原理经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选，该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选（Hanahan and Meselon 1980)。材料与仪器步骤一、材料
2024-06-01 26 -
黏粒文库的扩增和贮存(在液体培养基内扩增)
原理不要过度扩增黏粒文库，因为这样会不可避免地引起原基因组的失真。生长较快的克隆会过度呈现，不稳定的克隆会发生重排，而生长慢的克隆可能会从文库中完全消失。材料与
2024-06-01 42 -
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
原理应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不
2024-06-01 31 -
P1 噬菌体克隆在大肠杆菌宿主间的转移
原理从不同大肠杆菌菌株中获得的 P1 噬菌体 DNA 的产量与质量取决于宿主菌的基因型和重组子中外源 DNA 的特定序列。将 P1 或 PAC 重组子转化到不表
2024-06-01 34 -
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
材料与仪器带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒 带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒 pVgRXR 培养的哺乳动物细胞新霉素 松甾酮 A Zeo
2024-06-01 31 -
双杂交和其他双成分系统实验
材料与仪器载体和酵母菌缓冲液和溶液 SDS 凝胶上样缓冲液 SDS 聚丙烯酰胺凝胶 核酸和寡核苷酸 抗体 培养基专用设备步骤第一阶段 诱饵-LexA 融合蛋白
2024-06-01 62 -
用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验
材料与仪器结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白碱性缓冲液 封闭缓冲液 相互作用缓冲液PK 缓冲液 还原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中 洗涤缓冲液 1 洗涤
2024-06-01 31 -
GST 融合蛋白沉降技术检测蛋白质
材料与仪器细胞裂解液 其中蛋白质 35S 用标记裂解缓冲液 SDS 聚丙烯酰胺凝胶 探针 GST 蛋白沸水浴 翻转祥品旋转仪 谷胱甘肽琼脂糖球珠步骤材料缓冲液和
2024-06-01 32 -
通过免疫共沉淀确定结合蛋白实验
材料与仪器培养基中生长的适宜细胞株乙腈 考马斯亮蓝 R-250 EBC 裂解缓冲液 NETN 磷酸盐缓冲溶液 SDS 凝胶加样缓冲液 三氟乙酸 胰蛋白酶 胰蛋白
2024-06-01 32 -
GFP 和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验
材料与仪器进行转染的细胞株 按第二阶段所介绍的方法制备表达了蛋白质探针的细胞N-二羟乙基甘氨酸 消化缓冲液 N N-二甲基甲酰胺 磷酸钠 磷酸盐缓冲溶液 TE
2024-06-01 40 -
利用 BIAcore 分析相互作用的蛋白质
原理Biacore是基于表面等离子体共振（SPR）技术来实时跟踪在天然状态下生物分子间的相互作用，无需任何标记物。表面等离子体共振（surface plasmo
2024-06-01 33 -
细菌人工染色体的应用
原理细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome, RAC ) 是以大肠杆菌致育因子 (fertility, F)为基础的合成
2024-06-01 39 -
小量培养物中分离 BAC DNA
原理小量 BAC DNA 是从 5 ml BAC 转化细胞培养物中制备的。DNA 的制备采用碱裂解法。BAC DNA 的产量可达 0.1~0.4 μg，足够用
2024-06-01 30 -
大量培养物中分离 BAC DNA
原理BAC 重组子的精细分析，包括详细的限制酶切图谱、DNA 测序或亚克隆，所需 DNA 量都超过小量制备所能提供的量。本方案的制备流程适用于重组 BAC 的大
2024-06-01 37 -
酵母人工染色体的应用
原理直到 20 世纪 80 年代中期，尚无技术可用于基因组 DNA 黏性大片段的分离、扩增和分析。在此之前，如果要对某一 DNA 片段进行详细的物理和功能研究，
2024-06-01 26
