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SDS-蛋白酶K-苯酚抽提组织细胞DNA
简介SDS-蛋白酶K-苯酚抽提法提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离
2024-05-18 143 -
琼脂糖凝胶电泳
原理用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受
2024-05-18 121 -
Southern印迹技术
简介印迹杂交是指将待测核酸片段结合到一定的固相支持物上，然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术（Southern blot）是将D
2024-05-18 157 -
定量PCR
原理定量PCR（即时聚合酶链锁反应，Real-time Polymerase Chain Reaction，简称 Real-time PCR、即时PCR），又称
2024-05-18 100 -
原位缺口平移技术
简介原位切口平移技术又称为原位缺口翻译（in situ nick translation）。它最早用于研究DNA体外复制，其后又扩展至研究染色体、培养细胞与组织
2024-05-18 115 -
杆状病毒表达系统的建立
简介杆状病毒是双链 DNA 病毒，主要感染昆虫，也感染体外昆虫细胞系，对人畜无毒害。苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）是目前宿主最广、应用最多的杆状病毒
2024-05-18 102 -
验证候选基因以筛查表型
简介考虑到筛选过程可能很复杂，并且分析产生了一个候选基因的排序列表， 有必要验证已识别的候选基因对表型的干扰。为了验证，每个针对候选基因的 sgRNA 都可以单
2024-05-18 112 -
收集基因组DNA用于筛选分析
简介利用 CRISPR 进行基因组敲除和转录激活的筛选［以筛选 BRAFV6OOE （A375）细胞系中对 BRAF 抑制剂维莫非尼（PLX）有抗性的基因为例］
2024-05-18 129 -
慢病毒转导和筛选
简介根据所需的用途，sgRNA 库可以由慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒（AAV）提供。慢病毒和逆转录病毒整合到基因组中，而腺相关病毒不整合， 因此对于筛选，腺相
2024-05-18 116 -
慢病毒产生和滴度
简介根据所需的用途，sgRNA 库可以由慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒（AAV）提供。慢病毒和逆转录病毒整合到基因组中，而腺相关病毒不整合， 因此对于筛选，腺相
2024-05-18 137 -
二代测序确定 sgRNA 文库的 sgRNA 分布
简介插入缺失率可以用 SURVEYOR 核峻酶测定法或新一代测序技术测定，新一代测序技术更适合对大量 sgRNA 作用杷标位置进行采样。材料与仪器器材：Illu
2024-05-17 136 -
混合的 sgRNA 库的扩增
简介在整个 sgRNA 文库克隆和扩增过程中，要尽量减少任何可能影响筛选结果的潜在偏差。例如，在混合的 Oligo 文库合成过程的初始扩增中，应该限制 PCR
2024-05-17 123 -
克隆自定义 sgRNA 文库
简介在整个 sgRNA 文库克隆和扩增过程中，要尽量减少任何可能影响筛选结果的潜在偏差。材料与仪器器材：Axygen 八连排 PCR 管、Axygen PCR
2024-05-17 105 -
设计自定义的sgRNA文库
简介尽管每个 sgRNA 文库都是为特定目的而计算设计的，但基本的设计过程在文库之间是一致的。首先，根据已知的 sgRNA 靶向规则（如保守外显子 5‘
2024-05-17 109 -
可控表达 GH 转基因猪制备技术
简介可控表达 GH 转基因猪制备技术，由于畜禽生物育种和人类重大疾病的动物模型研究需要我们利用现代基因工程技术同时对一个动物基因组的两个或两个以上基因进行修饰，
2024-05-17 82
