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PCR耗材你选对了吗?

2024-08-25 耗材知识 加入收藏
【错过必后悔】PCR耗材你选对了吗? ---塑料耗材的什么是PCR?聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一项用于扩增

【错过必后悔】PCR耗材你选对了吗?  ---塑料耗材的

什么是PCR?

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一项用于扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,是在DNA聚合酶和核苷酸底物(dNTP)共同参与下,将目的基因扩增至足够数量,以便进行后续功能分析


 图为PCR反应流程简图




影响PCR实验的因素

在PCR实验中,影响扩增效果的因素有很多,通常有以下几种:

  1. 引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度;

  2. DNA聚合酶及dNTP的质量和浓度;

  3. 温度与时间的设置、循环次数的把控等;

  4. 设备及耗材的选择。

实际上,耗材的选择也确实会很大程度上影响实验的结果,而这往往被我们所忽略。因此在选择实验耗材前,我们还需要更深层次的了解PCR耗材相关的特性。

如何选择合适的PCR耗材

1、材质的选择

不管是普通的PCR还是实时荧光定量PCR(qPCR)其耗材一般都是选择聚丙烯(PP)材质。因生物学惰性特质其表面不易粘附分子,且有着良好的化学耐性及温度耐受性。这类耗材通常会与试剂或者样品直接接触,因而在生产制备过程中要求选用高质量的材料和良好的加工工艺。


2、选择合适的容积

A 容量大小


B 容量规格

容量规格常用标准容量(Standard Profile)和低容量(Low Profile)来区分,如下图所示。低容耗材的高度更低,这种短小设计最大程度地减少了反应体系上方的空间(即“死体积”—无用部分),提高热传导效率,降低热循环过程中的蒸发影响。因此,低容管也被称为“快速”管或板。




3、选择合适的种类


表 PCR耗材的分类


图 PCR 96孔板及封板膜部分细节展

1、裙边的意义更多在于为自动化,大批量处理提供便利,与机械臂的结合。在常规科研实验室中可能不太需要,使用无裙边板即可。

2、黏性铝膜可能比较少见,尽管不适合qPCR,但对于光敏样品还是合适的耗材,由于其可轻易穿刺,便于PCR中样品转移。


PCR管及八联管的选择


当样品量较少时,实验人员会优先选用单管或者8连管。但是单管或8连管的盖子又怎么选择呢?我们在进行选择时可参考下面的信息。


平盖:可为qPCR提供精确的荧光信号传递;便于书写标记。

凸盖:与PCR仪盖接触,减少压力引起的管变形等;但会影响荧光信号传递,无法应用于qPCR实验。


PCR管及板的颜色选择

PCR管和板通常可提供多种不同的颜色形式,以便于对于样品进行视觉区分和鉴别,特别是在高通量实验中。尽管耗材的颜色对DNA扩增没有影响,但在设置实时PCR或qPCR 的反应时,与透明耗材相比,更推荐使用白色耗材,以实现灵敏和准确的荧光检测。


图 1.qPCR使用透明和白色耗材的结果比较(A)与透明孔相比,白色孔Ct值更低(灵敏度更高)。(B)白色孔在技术重复中也表现出更高的一致性。

qPCR的核心数据是Ct值,而荧光信号是Ct值计算的数据来源,所以管内的荧光能否完好地传递至检测器是非常重要的。白色管壁能够阻止荧光穿过管壁和折射(下图A),进而防止荧光传至加热模块(放管子的金属孔壁),被模块吸收或发生不一致反射等情况。相比于透明管,在白管的顶端能够采集到更强,更聚焦的荧光信号(下图B)


图 A 透明管和白管中荧光信号走向;B 分别加入等量荧光素后,荧光强度对比


PCR耗材质量问题

这里强调一下耗材质量(是否干净)的重要性。PCR耗材必须保证没有污染物和抑制剂。高压和辐射能够去除细菌和DNA酶,但不能去除灰尘和DNA残留,它们可能会抑制PCR反应或产生非特异性扩增。物质是具有吸光度的,即便是很小的污染物也会吸收反应体系中的荧光,影响荧光信号的采集。因此,在生产这些塑料耗材时,从制模到最终的包装都必须在具有颗粒数量限制的设施环境中进行。


图 8联管的一个反应孔中放入杂质,结果扩增结果曲线出现了显著的异常。

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注意



取出耗材后,一定要快速封好包装袋,注意避免耗材长期暴露在空气中及裸手接触耗材。有条件的话,可在超净台中操作。


// 总结

summary



作为PCR体系构建的重要组成部分,对实验以及数据收集的成功塑料耗材的选择是至关重要的,特别是在高通量的工作流程应用中。了解PCR塑料耗材的基本信息将会有助于您作出正确的选择并获取最佳的结果。

 最后我们来看看常卖的货号吧~~         

PCR耗材


封膜板



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