【菌种使用】菌液的制备！

菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus  aureus)〔CMCC(B)26 003〕

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10 104〕

大肠埃希菌(Escherichia coli)〔CMCC(B)44 102〕

白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98 001〕

生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B)64  941〕

乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B)〔CMCC(B)50 094〕

2、菌液制备

2.1金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物置于TSA上或TSB中，30-35℃，培养18-24h。

2.2生孢梭菌的新鲜培养物置于FTM中，30-35℃，培养18-24h。

2.3白色念珠菌的新鲜培养物置于SDA上，20-25℃，培养2-3天。

2.4黑曲霉菌的新鲜培养物置于SDA上，20-25℃，培养5-7天，或直到活的丰富的孢子，用0.05%聚山梨酯的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05%聚山梨酯的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠制成适宜浓度的菌悬液。

2.5菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。

3、阴性对照

为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。