生化试剂盒常见问题Q&A

生化试剂盒应用领域广泛，涉及酶类、氧化应激、铁死亡、肝功能、肾功能、氨基酸蛋白、糖酵解、无机盐离子、脂质代谢、植物抗逆性等。检测样本类型丰富，涉及多种体液、组织、细胞、食品、植物、药物、化妆品等。主要的检测仪器为酶标仪和分光光度计。

生化试剂盒常见问题Q&A。

1、 常量法和微量法试剂盒能否通用？

同一指标的常量法与微量法试剂盒不可以通用，因为两者测定体系不同。

2、 试剂盒有哪些常见规格？

50管或50T的试剂盒，常量法试剂盒，用分光光度计检测，1mL的比色皿检测。

100管或100T的试剂盒，微量法试剂盒，用酶标仪（酶标板）或者分光光度计（0.25 mL比色皿）检测。

常见规格有：50T/48S，50T/24S，100T/96S，100T/48S。

3、试剂盒规格中50T/48S、50T/24S 、100T/96S和100T/48S是什么意思？

（1）50T/48S：50T指能够做50次测定，48S指可以测试48个样品。如果每个样品重复测定3次，那么只能测定16个样品。其中有2次测定用于空白管或者对照管。

（2）50T/24S：50T指能够做50次测定，24S指可以测试24个样品。如果每个样品重复测定3次，由于每个样品测定都需要做对照，因此能够测定样品的数量仅为8个。其中有2次测定用于空白管或者对照管。

（3）100T/96S：100T指能够做100次测定，96S指可以测定96个样品，如果每个样品重复测定3次，那么只能测定32个样品。其中有4次测定用于空白管或者对照管。

（4）100T/48S：100T指能够做100次测定，48S指可以测定48个样品，如果每个样品重复测定3次，由于每个样品测定都需要做对照，因此能够测定样品的数量仅为16个。其中有4次测定用于空白管或者对照管。

注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理论测定次数少1~3次。

4、试剂盒里哪些可以自行进行调整？

（1）样品质量：提取液体积比，用户可以根据预测定结果自行调整，测定结果偏低，可以适当加大上述比值，测定结果偏高，可以适当减小上述比值。但是同一批样品测定应该保持同样的上述比值。

（2）反应时间，用户可以根据预测定结果自行调整，原则是吸光度变化必须保持线性。吸光度变化偏小，可以适当延长反应时间；吸光度变化偏大，可以适当缩短反应时间。但是，同一批样品测定应该保持同样的反应时间。

（3）数据的单位，用户可以根据数据大小和习惯表达方式，进行适当调整，包括摩尔单位、时间单位和质量单位等，通常应该保证数据在小数点前三位和小数点后三位。

（4）同一研究的一批指标，应该调整为同样的单位，从而可以进行比较，便于分析。例如，物质浓度应该都用摩尔系列的单位，酶活性都用摩尔浓度/单位毫克蛋白质/单位时间，等等。

5、可以改变说明书中加试剂顺序吗？

绝对不可以，否则可能造成反应不能正常进行，导致测定失败。强烈建议加完试剂后立即混匀。

6、试剂变色后还可以用吗？

不可以。建议用户注意避光保存，使用前一定要观察试剂颜色是否正常。

7、试剂按照说明书冷藏后出现沉淀还能用吗？

可以。在常温中充分溶解后再用，以免试剂浓度变小，造成测定不可靠。

8、为什么有的试剂盒不提供标准品？

（1）为了节约用户经费，对于测定体系很稳定的试剂盒，研发时建立了标准曲线，在此基础上提供了计算公式。

（2）有些检测对象本身就无法购买到标准品。

9、UV板和普通酶标板有何区别？

微量法一般使用酶标板，当检测波长≥340nm时，用一般的酶标板即可，价格便宜，一次性使用也可以用UV板代替。当检测波长＜340nm时，须选用区别于一般酶标板的UV酶标板。价格比普通的酶标板贵，但可用洗板机清洗，重复利用。

10、比色皿有哪些规格？

（1）常量比色皿，如1mL和3mL等，若试剂盒选用1mL体系，只能用1mL比色皿，不可以用更大体积的比色皿，否则试剂量不够，无法正常比色。

（2）微量比色皿，如0.25mL和0.5mL等，试剂盒一般选用0.25 mL比色皿。一般客户都选择使用酶标仪（需要自备酶标板）。

（3）紫外波长检测需要石英比色皿，不可以用普通玻璃比色皿。

（4）不同规格的比色皿，其外观大小是一致的，都是1cm光径，若使用0.5 cm光径的比色皿，计算时要注意修改计算公式，其内容积差异在于壁的厚度。

11、如何确定试剂盒数量？

一般要求同一样品的同一指标测定重复三次。根据样品数量和重复次数（至少三次）以及试剂盒规格，计算所需试剂盒个数，试剂盒个数=样品总数×三次重复÷每个试剂盒能够测定的次数。个别测定数据存在疑问时，往往需要再次测定，以排除疑问。往往需要在计算的数量上再加20%左右。

12、试剂盒多久用完？

（1）为了保证测定质量，试剂盒开封后一般应该在一个月内用完。

（2）用户样品量大时，可以一次订购，分批生产和发货。

（3）特别值得注意的是，出于试剂稳定性考虑，说明书特别标明现配现用的试剂，配制后应该短时间内用完（如2小时），绝对不可以过夜。强烈建议用户在样品提取后，准备测定前，再现配现用，防止因为等待时间过长，导致试剂状态变化，造成测定结果不可靠。