花粉体外萌发及花粉管生长的观察

花粉作为植物的雄配子体，落到柱头上后，通过萌发生长出花粉管，将精细胞运至胚囊完成受精作用。花粉的萌发，以及花粉管的生长是植物有性生殖过程中的重要事件，常常将其作为研究植物细胞极性生长、分化及信号转导的重要体系。

材料与仪器

器材：

百合花粉。

器具：

① 显微镜

② 载玻片

③ 盖玻片

④ 镊子

试剂：

① KNO3 > MgSO4 > H3BO3

② Ca（NO3）2 > 蔗糖

步骤

花粉体外萌发及花粉管生长的观察的基本过程可分为如下几步：

（一）离体培养最优培养基的筛选

以百合花粉为材料，釆用液体培养法研究培养基中钙离子、硼离子、聚乙二醇（PEG），以及蔗糖浓度对百合花粉离体萌发生长的影响。

以蔗糖浓度为例：在液体培养基［0.99 mmol/L KNO3，0.08 mmol/L MgSO4，0.162 mmol/L H3BO3，1.27 mmol/L Ca（NO3）2，pH5.6］中分别加入 5%、10%、15%和 20% 4 个不同浓度的蔗糖，取一定量的花粉于上述液体培养基中 28 ℃，100 r/min 培养 2 h，然后将样品固定，统计分析不同浓度的蔗糖对花粉萌发和花粉管生长的影响，每个浓度重复 3 次，每次重复随机观察 3 个视野，每视野观察花粉数不少于 50 粒，统计花粉萌发率；同时用显微测微尺测量花粉管长度（μm），每视野随机测量 10 个花粉管，每处理共测 90 个花粉管长度，计算其平均值。数据釆用Excel进行处理，釆用 SPSS 进行显著性分析后将实验结果以图表的形式呈现，参考表 33-1。

表 33-1 不同浓度蔗糖对花粉萌发及生长的影响

（二）离体培养培养条件的优化

以百合花粉为材料，采用液体培养法研究培养基的 pH、培养温度和培养时间对百合花粉离体萌发生长的影响。

以培养时间为例：取一定量的花粉于液体培养基［10%蔗糖，0.99 mmol/L KNO3，0.08 mmol/L MgSO4，0.162 mmol/L H3BO3，1.27 mmol/L Ca（NO3）2，pH5.6］中，28 ℃， 100 r/min 培养，在 1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h 这几个时间点分别取样固定，然后在显微镜下观察并统计分析花粉萌发和花粉管生长的情况。

数据釆用 Excel 进行处理分析后将实验结果以图表的形式呈现，参考图 33-1。