考马斯亮蓝染色步骤全解析

1）前期准备

‌电泳结束‌：首先，通过SDS-PAGE电泳将蛋白质进行分离，电泳结束后，取出凝胶。

‌清洗凝胶‌：将凝胶放入加有超纯水的平皿中润洗，以去除残留的电泳液。如果凝胶较厚，可以适当增加洗涤次数和延长洗涤时间，以去除凝胶中的干扰杂质。

2）染色步骤

‌Step1配制染色液：考马斯亮蓝染色液通常由亮蓝G-250、甲醇、醋酸和去离子水组成。具体配方为：亮蓝G-250 0.1%（w/v），甲醇50%（v/v），醋酸10%（v/v），去离子水余量。
      将亮蓝G-250溶解在甲醇中，加入醋酸，再加入去离子水，调整到最终体积。

‌Step2‌加入染色液‌：将配制好的染色液倒入装有凝胶的容器中，确保染色液完全浸没凝胶。

‌Step3‌进行染色‌：将容器放在水平摇床上，室温下震荡染色。染色时间根据凝胶的厚度和所需染色深度进行调整，通常为30分钟至2小时。在染色过程中，要注意观察凝胶的变色情况，避免染色时间过长导致背景颜色过深。

3）脱色步骤

‌1.配制去染液‌：去染液通常由甲醇、醋酸和去离子水组成。具体配方为：甲醇40%（v/v），醋酸10%（v/v），去离子水余量。将甲醇和醋酸混合，再加入去离子水，调整到最终体积。

‌2.倒出染色液‌：染色结束后，倒出染色液或将其回收以备后用（通常可回收使用3次左右）。

‌3.加入去染液‌：将配制好的去染液倒入装有凝胶的容器中，确保去染液完全浸没凝胶。

‌4.进行脱色‌：将容器放在水平摇床上，室温下震荡脱色。脱色时间根据实验需求进行调整，通常为2-3小时或直至背景清晰。如果需要更低背景的凝胶，可以用纯水脱色1小时以上或过夜。

4）观察与记录

‌观察结果‌：将脱色后的凝胶放在显微镜下观察，可以看到清晰的蛋白质条带。

‌记录结果‌：使用相机或扫描仪将观察结果记录下来，以便后续分析和比较。

在操作过程中，需要注意以下几点：

——考马斯亮蓝染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，操作过程中一定要佩戴手套，避免染料接触皮肤。

——考马斯亮蓝染料有毒性，不建议加热使用。操作后需妥善处理废弃物。

——染色前用纯水清洗能大大减少SDS等干扰杂质。

——染色后请尽快拍照，纯水长时间浸泡会导致蛋白和染料的流失。