western blot为什么必须要用内参?

一、什么是内参？

内参，即内部参照物，是指在实验中用于校准和标准化的一组蛋白质或蛋白质组。在Western Blot实验中，内参可以帮助我们比较不同实验条件下的结果，确保实验的准确性和可靠性。

二、为什么必须使用内参

①避免实验误差：在Western Blot实验中，由于各种因素的影响，如样品处理、抗体浓度、曝光时间等，可能会导致实验结果出现误差。使用内参可以减少这些误差，提高实验结果的准确性和可靠性。

②确保实验条件一致性：Western Blot实验需要严格控制实验条件，以确保结果的准确性。使用内参可以确保每次实验的条件一致，包括样品的处理、抗体的浓度和曝光时间等。

③标准化样品处理：不同样品之间的蛋白质表达水平可能存在差异，使用内参可以作为标准化样品，将不同样品的信号强度进行比较，更准确地评估样品之间的差异。

质量控制：通过比较不同实验批次的内参信号强度，可以判断实验条件的稳定性和一致性，及时发现并纠正潜在的问题，确保实验结果的可靠性。

三、如何选择合适的内参？

①选择稳定的蛋白质作为内参

在选择内参时，应选择稳定性好、不易降解的蛋白质。这样可以确保内参在实验中的稳定性和可靠性。

②根据研究目的选择合适的内参

不同的研究目的可能需要不同的内参。因此，在选择内参时，应根据研究目的选择合适的蛋白质作为内参

常用的内参包括β-actin、GAPDH和α-tubulin等。这些内参在多数细胞系中均稳定表达，且已被广泛用于Western Blot实验中。然而，对于特定实验条件或特定样品，需要根据实际情况选择适合的内参。

四、注意事项

使用内参可以显著提高Western Blot实验的可靠性和可重复性。然而，需要注意的是：

（1）内参并非万能的神器，对于某些特定情况（如特定细胞系、特定生理或病理条件），可能没有理想的内参可用；

（2）内参的表达水平也可能受到某些因素的影响（如pH值、温度等），因此需要仔细控制实验条件；

（3）在分析实验结果时，需要结合实际情况考虑内参的可靠性。如有必要，可以采用多种内参进行比对分析。

五、结论

总之，在Western Blot实验中，使用内参是提高实验可靠性和可重复性的重要手段。然而，选择合适的内参并正确使用内参是关键。了解内参的作用、选择合适的内参以及注意事项是每个进行Western Blot实验的研究者必须掌握的基本知识。只有这样，我们才能获得更准确、可靠的实验结果。