免疫荧光染色操作步骤以及目的——细胞篇

一、实验目的

通过细胞免疫荧光技术，检测p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231细胞中的表达。

二、实验样品及分组

细胞：MCF-7、MDA-MB-231

指标：P53（proteintech10442-1-AP）

三、实验结果

四、实验结论

IF染色结果显示：

p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231有表达，阳性染色为相应荧光素标记的绿色，胞核为DAPI标记的蓝色。

五、实验材料

1、主要仪器

2、主要试剂 

六、实验原理

免疫荧光细胞是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

七、实验步骤

(1)在培养板中将已爬好细胞的玻片用生理盐水浸洗3次；

(2)用4%的多聚甲醛固定爬片15 min， 生理盐水浸洗玻片3次；

(3)0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透15min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

(4)生理盐水浸洗玻片3次，吸干生理盐水；

(5)每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗，4℃孵育过夜；

(6)加荧光二抗：生理盐水浸洗爬片3次，每次3 min，吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中37℃孵育1h，生理盐水浸洗3次；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量避光操作；

(7)复染核：滴加DAPI避光孵育5 min，对标本进行染核，生理盐水4次洗去多余的DAPI；

(8)在荧光显微镜下观察采集图像。