细胞介导细胞毒作用检测法5：用MTT检测法测定CMC

用 MTT 检测法测定 CMC

1． Fen 细胞培养于含 10 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液中，在 25cm2 培养瓶中生长到接近汇合。用含 0.05 ％胰蛋白酶， 0.02 ％ EDTA 的 PBS 消化细胞 5 分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成 1 × 105 /ml 。

2． 取 96 孔细胞培养板，每孔加 0.1ml 细胞悬液，在 37 ℃ 5 ％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养 24 小时，让细胞帖壁。每孔加 0.1ml 效应细胞悬液，效靶比 10 ： 1 到 50 ： 1 ，继续培养 4 小时，让效应细胞发挥杀伤效应。实验中，设立只有靶细胞的无杀伤对照和只有 效应细胞的阴性对照，每种处理设 3 各复孔。

3． 用含 2 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液洗涤各孔 3 次，洗去不粘附的细胞。每孔加 0.1ml 含 2 ％小牛血清的 RPMI-1640 培养液和 10 μ l 5mg/ml 的 MTT 染液，继续培养 3 小时。

4． 用 PBS 洗涤 2 次，每孔加 0.1ml 含 0.04mol/L HCl 的异丙醇，室温 30 分钟，溶解形成的结晶。在 570nm 波长处，用酶联检测仪检测各孔的光吸收值（ OD ）。

杀伤活性（％）＝（ OD 实验孔－ OD 阴性对照） /OD 无杀伤对照× 100