质粒抽提的详细实验步骤是怎样的？

质粒抽提实验步骤由普拉特泽生物工具平台总结分享。普拉特泽生物工具平台保存有大量的细胞质粒、组织切片等生物资源，同时可以为基础科研人员提供质粒抽提的实验外包服务，本文给大家介绍质粒抽提的详细实验步骤：

一、质粒抽提实验准备

1、实验设备准备：超净工作台、微量移液器、电热恒温鼓风干燥箱、电子天平、-80℃超低温冰箱、移液器、超微量核酸分析仪、反渗透超纯水机、立式圆形压力蒸汽灭菌锅、离心机、凝胶成像系统

2、实验试剂准备：1.5 mL EP管、乙醇、低内毒素质粒提取试剂盒、核酸染料、琼脂糖、6×Loading Buffer

二、试剂盒法抽提质粒实验原理

质粒是细胞内的一种环状小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。作为一个具有自身复制起点的复制单位独立于细胞的主染色体外。 质粒DNA上携带了部分的基因信息，通过基因表达后能使其宿主细胞表现相应的性状。在DNA重组中，质粒或者经过改造的质粒载体可以通过连接外源基因构成重组质粒。

三、质粒抽提实验步骤

1、细菌培养

取灭菌的试管，在超净工作台中加入10 mL LB含相应抗性的培养基，然后吸取10 µL菌液（或者从平板上挑取单菌落）接种到培养基中，做好标记，37℃/200 rpm 于摇床中过夜培养。

2、保菌

从摇床中取出试管，在超净工作台中取灭菌的1.5 mLEP管做好标记，吸取400 µL菌液于EP管中，再加入200 µL30%的甘油。

3、质粒提取---试剂盒法

根据购买的试剂盒详细操作。

4、 琼脂糖凝胶电泳检测

（1）取50×TAE缓冲液10 mL加水至500 mL，配制成1×TAE稀释缓冲液待用。

（2）制备胶液

（3）制备胶板：制胶时先将胶槽及底板完全清洗并擦干，胶槽置于水平支持物上，插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1 mm左右的间隙。

（4）加样：取400 ng 质粒(根据所测浓度计算体积)与1 μL 6×DNA Loading Buffer混匀，用微量移液器小心加入样品槽中。每加完一个样品要更换枪头，以防止交叉污染，注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。

（5）电泳：加完样后立即接通电源。电泳30min后停止。

（6）观察：在波长为254 nm的紫外灯下观察。DNA存在处可以见到桔红色荧光条带，凝胶电泳成像。