外泌体鉴定的三个标志与应用

据国际细胞外囊泡学会（ISEV）在2014年的提议，外泌体鉴定3个标志：透射电镜（transmission electron microscope，TEM）、粒径（Nanoparticle Tracking Analysis, NTA）、蛋白标志物（Western Blot, WB）。

1、透射电镜(TEM)

外泌体透射电镜分辨率为0.1~0.2nm，适合外泌双层囊膜超微结构观察，可观测样本中是否存在外泌体样结构(通常为茶托型或一侧凹陷的半球形，如图1)，同时可测里外泌体大小。

2、粒径(NTA)

该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。

3、蛋白标志物(WB)

外泌体Western blot检测可含内参检测，外泌体中的β-Actin的表达丰度相对于正常细胞样品中的较低，外泌体WB检测时可能会检测不到任何条带或者条带微弱。外泌体在分子生物学方面的应用如下:

1、外泌体作为药物载体，实现靶向给药。外泌体具有负载“货物“并将其传递给靶细胞的能力，输效率高、稳定性好和靶向性强以及能跨越血脑屏障等独特优势。外泌体也适合递送各种化学物质、蛋白质、核酸等。BullerB等将负载miR-146的外泌体注射至患有角质细胞瘤小鼠的肿瘤部位，发现miR-NAs有效的抑制了肿瘤的生长。

2、疾病诊断的分子标志物。不同疾病的不同类型细胞都能分泌含有不同niRNAs和RNAs的外泌体，使得从病人的体液中分离外泌体作为疾病诊断成为可能，尤其在肿瘤诊断中。除此之外，外泌体还可以应用于非肿瘤疾病的诊断。Welker MW等研究发现血清外泌体CD81可能是慢性丙型肝炎诊断的潜在蛋白标志物。

3、促进组织修复和再生。近年的研究发现，干细胞来源外泌体是干细胞旁分泌活动的一种重要方式，可介导其促进组织再生。Chen等发现，ADSCs-exo的联合治疗可减少大鼠急性缺血性卒中的梗死面积，促进神经功能恢复。ADSCs-exo可以避免干细胞治疗的免疫排斥、伦理问题等缺点，且具有高稳定性、易于储存、无需增殖、便于定量使用等优势，与单一的细胞因子比较，具有较高的安全性和更大的组织再生潜能。