外泌体提取步骤

 一、什么是外泌体？

 外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为 30-200 nm，密度在 1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞（免疫细胞、神经细胞、干细胞)，都可以产生并释放 exosome。目前外泌提取主要有超速离心、过滤离心、试剂盒提取等方法。

二、实验流程

血清/血浆样本:

1，分离得到血浆/血清。

2.低速离心去除碎片及杂质。

3.超速离心获得外泌体沉淀。

4.外泌体纯化。

5.BCA法检测外泌体浓度。

培养上清样本:

1.培养液收集。

2.低速离心去除细胞、碎片及杂质。

3.超速离心获得外泌体沉淀。

4.外泌体纯化。

5.BCA法检测外泌体浓度。

即在4℃下，首先300Xg离心10min，吸取上清液，然后2000Xg离心10min;吸取上清液后，10000Xg高速离心30min，吸取上清液;140000Xg超速离心90min;除去上清液，所获得的沉淀即为外泌体。用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后，140000Xg再次离心90min，100μLPBS缓冲液重悬沉淀，冻存于-80℃备用。