粒细胞检测实验原理与流程

粒细胞检测最常用的方法是流式检测，其实验原理是流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号，利用这些信号，可计算出相对含量，从而得到细胞群的相对比值。

一、常用的检测指标中性粒细胞（人）：CD15、CD16、CD49d（-）

噬碱性粒细胞（人）：CD123、CD203c、CD117(-)

噬酸性粒细胞（人）：CD11b、CD193、EMR1

中性粒细胞（鼠）：CD11b、Ly6G、CD115（-）

噬碱性粒细胞（鼠）：CD200R3、FcεRIα

噬酸性粒细胞（鼠）：CD11b、CD193、F4/80

二、粒细胞检测的实验流程如下

1、制成单细胞悬液（组织样本）

2、溶血（细胞样本无需进行此步骤）

3、离心去上清

4、调整细胞密度

5、加入相应的标记抗体

6、孵育

7、洗涤后离心去上清

8、上机检测

三、粒细胞检测注意事项

1、为保证所得结果的可靠性，每次实验前应用标准荧光微球检测仪器的变异系数；

2、每次应做阴性对照、阳性对照、质控对照、以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低；

3、外周血单个核细胞（PBMC）是一些科研实验中经常用的材料，是利用Ficoll从全血中提取得到，主要为淋巴细胞和单核细胞；需要检测粒细胞等多形核细胞，就需要避免用PBMC需提供全血。