非酒精性脂肪肝造模详细步骤

1、实验准备

实验材料准备：SD大鼠40只，体重200~~220g，清洁级；猪油、鸡蛋黄自备；高脂造模饲料；普通饲料

2、实验方法

（1）动物分组及处理SD大鼠40只，随机分为两组各20只。除正常对照组外，全部给予高脂饮食复制非酒精性脂肪性肝炎模型。

（2）高脂饮食由普通饲料加15%猪汕，8%蛋黄粉，2%胆固醇组成，观察动物的体重、饮食、毛发、活动情况、肝/体重比等。。

（3）在造模第4周、8周、18周分别处死模型组动物各2只，观察其病理模型形成情况。

（4）第18周末将大鼠用2%戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔注射，麻醉后下腔静脉取血，将血标本离心后用于血脂检测;取肝左叶，用10%中性福尔马林溶液固定。

（5）石惜包埋切片，作肝细织病理学观察。

3、实验结果

（1）动物的一般情况

实验期间正常组动物精力充沛，灵活好动，饮食正常，皮毛整洁，体重缓慢增加；

模型组饮食量大，嗜睡，毛色偏黄，个体较大，体重增长较正常组较快，至8周时，模型组各动物体重较正常组平均重21%，有不同程度的精神萎靡，活动减少，皮毛凌乱。

（2）体重和肝指数

两组大鼠体重和肝指数，模型组较正常组体重及肝指数均显著增加

（3）血脂

检测两组大鼠的血脂，模型组与正常组相比，有显著的差异性。

（4）肝脏病理学变化

肉眼观察：肉眼观察正常组大鼠肝脏形态正常，18周时无一例出现异常。模型组大鼠造模4周起肝脏外形稍饱满圆钟，质地较脆，色红；8~12周肝脏体积增大，包膜紧张，色泽灰黄，切面油腻；18周时，模型组动物肝脏明显增大，包膜紧张，边缘较钝，质地略软，色变黄，表面呈花斑状，触之似泥块并有油腻感，部分大鼠肝脏有黄白鱼的局灶性脂肪沉积。

光镜观察：

正常组肝小结构正常，肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列。无肝细胞肿胀及脂肪变性。模型组肝组织HE染色显示：造模4周后大鼠肝脏即有轻微的肝细胞脂肪变性，标本还出现汇管区及小叶内炎症细胞浸润和散在的点状坏死；造模8周大鼠多呈中度脂肪变，且炎症活动积分明显高于造模4~8周大鼠，可见到小叶内炎症，炎症细胞主要以单核细胞为主，炎症程度明显加重；造模18周大鼠呈中重度的大泡性脂肪变，脂滴分布密度通大，可见大部分旺细胞浆含大脂滴，部分脂滴形成大空泡。将细胞核挤压至一边，目以中央静脉周围为其:肝小叶结构破坏，肝细胞排列不规救，并伴大量肝细胞肿胀，部分呈气球样变，汇管区炎症尚轻微。