耐药细胞株构建详细步骤步骤

1、细胞复苏

(1)将ddH₂O预温至37℃。

(2)戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管（内有1 mL细胞混合液），立即投入37℃ddH₂O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3)完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4)在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

(5)1mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5%CO₂培养箱培养。

(6)48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

2、细胞给药+培养

HSC-3细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM培养基，在37℃饱和湿度、含5%CO₂的培养箱中培养。

3、细胞处理

向细胞中加入10.36μg/mL阿帕替尼进行处理，至筛选出可以在含有10.36μg/mL阿帕替尼的培养基中稳定传代的细胞。