GST pulldown实验原理与介绍

GST pull-down实验---GST：谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase)是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的磁珠上,作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液与之孵育，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白，“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。GST：谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase)

GST pull-down技术主要在体外验证两种蛋白之间是否存在直接的相互作用，其用途主要有两个方面：一是证实两种已知蛋白之间可能存在的相互作用；二是用于寻找能与已知的蛋白发生相互作用的未知蛋白。详细作用有：

1.确定某一个蛋白质与另一个蛋白质的直接作用关系。

2.筛选某一个蛋白质直接结合的蛋白质族群。

3.验证酵母双杂交系统结果的有效性。

GST pulldown检测的优势与不足

优势：

1.区别于CoIP，GST pull down技术可以明确两个蛋白质之间是否直接作用。

2.可用于筛选与目的蛋白质直接结合的蛋白质族群。

3.可联合酵母双杂交系统综合评估蛋白质之间的相互作用关系，是一个有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。

不足：体外表达的重组蛋白，无法完全模拟特定生理状态下的蛋白质活性及结合情况。