酵母杂交实验的常见问题—试剂篇

问题一：经典转化试剂盒和Super转化试剂盒是否需要准备其它试剂？

答：需要准备DMSO，无菌水或者无菌生理盐水，无需其它试剂。

问题二：50%PEG3350溶液是否可以高压灭菌？

答：经过Coolaber检测，PEG3350高压灭菌可以用于酵母转化，但过滤除菌的PEG有更高的转化效率。高压灭菌可能会导致PEG分子量或浓度发生变化，从而影响转化效率。建议选择过滤除菌PEG溶液。

问题三：50%PEG溶液过滤除菌太慢是否正常？

答：50%PEG粘稠，针头滤器过滤太慢，可选用大面积的真空抽滤设备除菌。

问题四：Carrier DNA是否需要预变性处理以及处理方法？

答：Coolaber的Carrier DNA已经做过变性处理。基于保证转化效率的目的，产品使用前可以再次变性处理。建议分装至PCR管内，于PCR仪（设置98℃10 min，4℃2 min）处理后冷冻保存。变性Carrier DNA可以反复冻融三次，超过三次需要再次变性处理。

问题五：Carrier DNA是否可以由鲑鱼精DNA制备以及制备方法？

答：可以。但是制备方法复杂，需要溶解，剪切并测定分子量大小，制备方法参照分子克隆。

问题六：YPD Plus Liquid Medium的作用是什么？

答：YPD Plus Liquid Medium用于酵母转化后的复苏培养，经Coolaber检测，在增加复苏培养步骤后，转化子的数量可以增加50%-100%，在文库转化中作用明显。但在互作验证或单个质粒转化实验中，经典转化Kit或Super转化Kit的转化效率完全可以满足实验要求。YPD plus营养丰富，极易污染，产品包装为4×25 mL形式，长期不用请置于-20℃保存。

问题七：酵母转化PEG/LiAC混合液的成分和用途？

答：酵母转化PEG/LiAC混合液（CAT：YT0006）由50%PEG、1M LiAC、10×TE按照8:1:1组成。按照每100μL感受态细胞加入500μL混合液进行转化反应，具体方法可以参照Coolaber酿酒酵母感受态细胞的使用说明。

问题八：1×TE/LiAC混合液（即用型）的成分和用途？

答：1×TE/LiAC混合液（即用型，CAT：YT0009）与通常说的1.1×TE/LiAc浓度一致，成分为110 mM LiAC及1.1×TE。主要用于制备酵母感受态细胞，具体可以参照SK2400或SK2401的使用说明。

问题九：菌落转化Kit（SK2390）在什么情况下可以使用？

答：菌落转化Kit可以满足大多数单个或者两个载体转化的实验，在菌落数满足要求的条件下，每μg质粒转化后会得到50个以上的转化子。